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小菜虫想长大

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞增殖与凋亡 已有1人参与

各位细胞培养的高手们,求助!我要验证我的样品对细胞生长抑制的影响,前期做了50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml和800μg/ml 不同添加浓度的MTT试验,以不加样品组为阴性对照,结果比较理想,算得lgIC50为331μg/ml,得到了我的样品可以抑制细胞增殖的结论。然后我选择了50μg/ml、200μg/ml、800μg/ml 进行流式细胞仪检测细胞凋亡,以不加样品组为阴性对照,结果很不好,阴性对照组正常的活细胞为88.53%,三个试验组分别为87.29%、88.33%和90.08%。后面又用流式细胞仪检测了细胞周期,阴性对照G1期为62.74%,三个试验组G1期分别为63.73%、61.05%和60.71%。我的问题是,如果结合细胞凋亡试验与MTT试验结果,解释为我的样品只能抑制细胞增殖但不能诱导它凋亡,那么抑制增殖在细胞周期的结果中也应该有所体现,为什么细胞周期各个浓度之间也几乎没有区别?抑制细胞增殖还有别的机制?
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风信子寻梦

木虫 (职业作家)

个人观点:首先,你取的三个浓度50、200、800有点问题,最好是多取几个浓度,如果你只取三个浓度的话,个人建议你将200换成300左右;第二,不知道你做流式之前有没有在显微镜下直接观察细胞的状态,在表观上有没有活细胞的差别;个人建议你从新做一次流式吧!
2楼2014-08-28 15:11:32
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qingzfla

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

做流式前最好看看不同浓度药物作用细胞后,细胞的生长密度或其形态有无差异,如果没有差异,就不要做流式了,尤其你的药物浓度差距那么大,只能说明你加药存在问题。再者抑制细胞增殖,不一定等于细胞不增殖了,实验再做一次吧。
学海无涯,做专业的人做专业的事
3楼2014-09-13 17:02:47
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