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枫林里的佳

木虫 (小有名气)

[交流] 高效液相色谱柱做了实际样品偶怎么更好的维护色谱柱 已有1人参与

我用高效液相色谱做牛奶实际样品后,柱压上升了50psi左右,用0.2的甲醇冲了15个小时以上柱压还是不能降下来,请问虫虫们知道怎么样可以把柱压降下来呢?还是做了实际样品柱子就有损伤且不可恢复了?这里我的样品处理可能有问题,用的是异辛烷(国产的液相色谱级)离心沉淀牛奶,然后用0.45um的滤膜过滤了一次就拿去进样了,进样体积10uL,不过只进了一针,发现有点不对劲,就冲洗柱子了,但是冲了快20个小时了,还是不能降下来(之前做一直是170psi左右,现在都是220psi左右),都不敢继续进样了,担心做了压力又一直往上跑,后面的工作就不能做 了,
在这里请教大家,我的样品这样处理能进样么?还有就是,如果样品没有处理好但是又进样了,怎么样可以更好的维护色谱柱呢?再次谢过大家!!!
还想确定一个加标回收率的问题,是在样品处理之前加标还是样品处理之后进样时再加标呢?谢谢大家
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以试试SPE做前处理,除掉蛋白的影响,另外,建议你用上保护柱
人生若只如初见...
6楼2014-08-27 17:00:16
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

★ ★ ★ ★ ★
枫林里的佳: 金币+5, O(∩_∩)O谢谢,就是不想做SPE额…… 2014-08-27 19:08:04
如果是蛋白的问题,导致压力升高,柱子脏的话,可以考虑乙腈和水,各加0.1%TFA做流动相,梯度洗脱,这个对于一般的蛋白影响会有效果
人生若只如初见...
7楼2014-08-27 17:01:32
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