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枫林里的佳

木虫 (小有名气)

[交流] 高效液相色谱柱做了实际样品偶怎么更好的维护色谱柱已有1人参与

我用高效液相色谱做牛奶实际样品后,柱压上升了50psi左右,用0.2的甲醇冲了15个小时以上柱压还是不能降下来,请问虫虫们知道怎么样可以把柱压降下来呢?还是做了实际样品柱子就有损伤且不可恢复了?这里我的样品处理可能有问题,用的是异辛烷(国产的液相色谱级)离心沉淀牛奶,然后用0.45um的滤膜过滤了一次就拿去进样了,进样体积10uL,不过只进了一针,发现有点不对劲,就冲洗柱子了,但是冲了快20个小时了,还是不能降下来(之前做一直是170psi左右,现在都是220psi左右),都不敢继续进样了,担心做了压力又一直往上跑,后面的工作就不能做 了,
在这里请教大家,我的样品这样处理能进样么?还有就是,如果样品没有处理好但是又进样了,怎么样可以更好的维护色谱柱呢?再次谢过大家!!!
还想确定一个加标回收率的问题,是在样品处理之前加标还是样品处理之后进样时再加标呢?谢谢大家
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liwentao2010

荣誉版主 (文坛精英)

山涛

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
枫林里的佳: 金币+5 2014-08-28 09:22:23
柱压升高,一种是柱子坏了,一种是仪器中泵堵塞。检查时,先卸掉色谱柱,冲洗仪器,看看柱压是否下降,直到稳定,若是柱子损坏,先冲喜一阵子,柱压还是很高,估计要更换色谱柱。
加油!
8楼2014-08-27 19:14:21
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anwiner

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
枫林里的佳: 金币+8 2014-08-28 09:23:11
1.将色谱柱拆卸下来,然后接上两通
2.打开purge阀,设置柱流速为5,观察泵头压力是否在10bar之内,说明泵前面的管路不存在堵塞
3.接下来排查流通池是否存在堵塞,可以先用10%甲醇冲洗系统,再用10%异丙醇冲洗系统,如果压力下降的话,说明液相系统木有问题
4.木有问题的话,是色谱柱的问题
希望LZ分享解决后的方法
9楼2014-08-27 22:25:53
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以试试SPE做前处理,除掉蛋白的影响,另外,建议你用上保护柱
人生若只如初见...
6楼2014-08-27 17:00:16
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

★ ★ ★ ★ ★
枫林里的佳: 金币+5, O(∩_∩)O谢谢,就是不想做SPE额…… 2014-08-27 19:08:04
如果是蛋白的问题,导致压力升高,柱子脏的话,可以考虑乙腈和水,各加0.1%TFA做流动相,梯度洗脱,这个对于一般的蛋白影响会有效果
人生若只如初见...
7楼2014-08-27 17:01:32
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普通回帖

BOting

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
枫林里的佳: 金币+5 2014-08-27 15:28:04
保证进样样品对柱子没有损坏,进样量可调整,进样后洗柱子,经常巡检各参数在允许的范围内。

[ 发自小木虫客户端 ]
开心就好。。。给自己一个微笑
2楼2014-08-27 12:39:10
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kangshisan

捐助贵宾 (职业作家)

m锛瀢

[ 发自小木虫客户端 ]
By_work,all_things_increase_and_grow.
3楼2014-08-27 12:59:41
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kangshisan

捐助贵宾 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kangshisan at 2014-08-27 12:59:41
m锛瀢

fan.chong

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By_work,all_things_increase_and_grow.
4楼2014-08-27 13:00:22
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枫林里的佳

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by BOting at 2014-08-27 12:39:10
保证进样样品对柱子没有损坏,进样量可调整,进样后洗柱子,经常巡检各参数在允许的范围内。

谢谢,但是怎么判断进样样品对柱子有无损坏?
5楼2014-08-27 15:28:51
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枫林里的佳

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by anwiner at 2014-08-27 22:25:53
1.将色谱柱拆卸下来,然后接上两通
2.打开purge阀,设置柱流速为5,观察泵头压力是否在10bar之内,说明泵前面的管路不存在堵塞
3.接下来排查流通池是否存在堵塞,可以先用10%甲醇冲洗系统,再用10%异丙醇冲洗系统 ...

现在这根柱子用的时间还不长,只是这次做了样品明显发现压力上升,大概上升了50 psi 左右,总的压力也不是很大,有 220 psi,做样品之前只有170 psi,只是发现进了一针就这么明显,会不会是我的样品有问题,还是这是正常情况?所以接下来就暂时就没敢做了,
10楼2014-08-28 09:28:23
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