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双酶切求助已有3人参与
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目的条带大小应为3447bp，使用kpn1和sal1两种限制性内切酶，菌液PCR如图1，选取1、2、3、5继续试验，扩大培养后双酶切电泳检测如图2，酶切时间3小时后又在4度冰箱里放置了一个多小时；图3也是双酶切图，酶切时间两个半小时，感觉有些符合要求，但是由于使用的胶板上排梳子之前用过，有些重叠，所以用剩余样品重新跑了胶，此时样品酶切了两个半小时后在4度冰箱里放了一个小时左右，再次电泳检测结果和如图2一样。（所以载体为Pmd19，大小2692bp）求高手解释一下原因，为什么会出现这样的结果？？非常感谢！ 图1  图2  图3 |
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