24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4340  |  回复: 32
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

[求助] 求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了! 已有6人参与

本人近期在构建原核表达载体,用的是pET-32a载体,BamHI和Xhol酶切位点(在软件上搜索过了,目的基因不含这两个酶切位点),连接、转化好后,菌液PCR鉴定均未阳性,但是酶切,不论切1h,2h,3h,一直都是四条带,奇怪的很。麻烦大家帮我看看是怎么回事呢?谢谢大家了!
      下面是电泳图,1(目的基因1000bp左右)、3 (目的基因300左右)泳道是重组质粒双酶切的结果,2,4泳道是没被酶切的重组质粒。Marker不小心点错了,点成600的了。

求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了!


求助!双酶切验证总切出来四条带,请亲们帮忙看看,非常着急啊!谢谢大家了!-1
93585E02CF1B31AAB0EC2CAA368D37C8.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

WOAIDACHANG

禁言 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

15楼2014-08-23 19:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 33 个回答

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

为什么没有人呢?
2楼2014-08-22 09:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangxiwu123: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-08-22 10:57:44
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-22 14:40:00
你的质粒,切了和不切的,大小几乎一样的。
而且,你的1应该是目的条带300吧,怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点,那你把原始载体切了看看。
最后,重新制备载体,片段,重新做。一定要酶切完全。
3楼2014-08-22 10:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxiwu123

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-22 10:21:34
你的质粒,切了和不切的,大小几乎一样的。
而且,你的1应该是目的条带300吧,怎么看都不会是1000啊。
如果自己不能确定载体有没有这两个酶切位点,那你把原始载体切了看看。
最后,重新制备载体,片段,重新做。 ...

哦,不好意思,说错了,1是300,3是1000的,原始载体我做过双酶切了,是一条带,载体应该没什么问题。如果用fermentas的酶,酶切一般酶切过长时间呢?
4楼2014-08-22 10:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自然面上和省基金B类撒花 +17 花田半亩~白 2026-04-21 17/850 2026-04-23 07:30 by john198197
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人!!! +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博 +3 Xyyx. 2026-04-18 3/150 2026-04-20 10:44 by YuY66
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
请填处理意见