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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 求指导提质粒过程中应注意的事情
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爱一生恋一世

银虫 (小有名气)

[交流] 求指导提质粒过程中应注意的事情 已有6人参与

这几天提质粒，用的ET，可是提了3次了   ，提出来的质粒效果都不太好，师姐也是用的同样的ET提的质粒电泳后就很亮，都是用的碱变性法提的啊    ，大家觉得这个过过程应该注意些什么啊？
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任何事情只有靠自己
1楼 2014-08-20 16:17:27
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-22 19:54:51
你跟着你师姐提一次，看看她加的试剂量等。
我个人觉得以下需要注意：
1.加溶液2后需要轻轻颠倒混匀，不要太过于剧烈。
加溶液3后也是轻轻上下颠倒混匀。
2.加70%乙醇洗的时候，加个400就够了。
3.从离心的方向上顺着管壁加TER溶解，因为质粒都在那一侧。然后放到37度溶解个10min就可以了。

如果你提几次都是这样，那你同时提你的和你师姐的，看看是技术原因还是菌液的原因。
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2楼2014-08-21 16:44:07
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凤丫头1988

银虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-22 19:54:41
加完溶液II 和溶液III以后都在冰上放2-3分钟，冰上反应不会太剧烈，避免提到基因组片段
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最小的事情也要尽力
3楼2014-08-22 10:44:02
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Hliotrope

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-22 19:54:46
质粒很好提的啊，有试剂盒按试剂盒走绝对没问题，碱裂解那步（溶液2），时间别太长，别剧烈摇晃。。。
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Someone
4楼2014-08-22 11:00:12
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分子2010

银虫 (小有名气)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:20:38
1、溶胶完全就行了，不用太久。
2、最后我们加的是双蒸水，用65度加热过的，并且离心后再把溶液洗出来加到膜上在洗一次。
希望能帮到你。
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科研是条不归路！
5楼2014-08-22 20:37:56
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想个用户名

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 分子2010 at 2014-08-22 20:37:56
1、溶胶完全就行了，不用太久。
2、最后我们加的是双蒸水，用65度加热过的，并且离心后再把溶液洗出来加到膜上在洗一次。
希望能帮到你。

人家说提质粒，你让人家溶胶！不认真哦～
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6楼2014-08-23 08:59:23
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WOAIDACHANG

禁言 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励交流 2014-08-23 20:20:49
本帖内容被屏蔽
7楼2014-08-23 19:17:39
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爱一生恋一世

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-08-21 16:44:07
你跟着你师姐提一次，看看她加的试剂量等。
我个人觉得以下需要注意：
1.加溶液2后需要轻轻颠倒混匀，不要太过于剧烈。
加溶液3后也是轻轻上下颠倒混匀。
2.加70%乙醇洗的时候，加个400就够了。
3.从离心的方向 ...

不好意思现在才回复你    非常感谢你的建议
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任何事情只有靠自己
8楼2014-10-03 15:04:27
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