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爱一生恋一世

银虫 (小有名气)

[交流] 求指导提质粒过程中应注意的事情已有6人参与

这几天提质粒,用的ET,可是提了3次了   ,提出来的质粒效果都不太好,师姐也是用的同样的ET提的质粒电泳后就很亮,都是用的碱变性法提的啊    ,大家觉得这个过过程应该注意些什么啊?
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分子2010

银虫 (小有名气)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:20:38
1、溶胶完全就行了,不用太久。
2、最后我们加的是双蒸水,用65度加热过的,并且离心后再把溶液洗出来加到膜上在洗一次。
希望能帮到你。
科研是条不归路!
5楼2014-08-22 20:37:56
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-08-22 19:54:51
你跟着你师姐提一次,看看她加的试剂量等。
我个人觉得以下需要注意:
1.加溶液2后需要轻轻颠倒混匀,不要太过于剧烈。
加溶液3后也是轻轻上下颠倒混匀。
2.加70%乙醇洗的时候,加个400就够了。
3.从离心的方向上顺着管壁加TER溶解,因为质粒都在那一侧。然后放到37度溶解个10min就可以了。

如果你提几次都是这样,那你同时提你的和你师姐的,看看是技术原因还是菌液的原因。
2楼2014-08-21 16:44:07
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凤丫头1988

银虫 (初入文坛)

★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-22 19:54:41
加完溶液II 和溶液III以后都在冰上放2-3分钟,冰上反应不会太剧烈,避免提到基因组片段
最小的事情也要尽力
3楼2014-08-22 10:44:02
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Hliotrope

木虫 (著名写手)

★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-08-22 19:54:46
质粒很好提的啊,有试剂盒按试剂盒走绝对没问题,碱裂解那步(溶液2),时间别太长,别剧烈摇晃。。。
Someone
4楼2014-08-22 11:00:12
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