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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 初生小鼠卵巢石蜡包埋制作的问题，交流交流
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running113

木虫 (著名写手)

[交流] 初生小鼠卵巢石蜡包埋制作的问题，交流交流

最近一直在做初生小鼠（B6）的卵巢石蜡切片。关于包埋的过程，本人遇到一些问题需要解决，不知坛里大侠们有没有解决办法。
1：初生小鼠卵巢太小，浸酒精、二甲苯，特别是石蜡的过程中容易把卵巢弄丢，不知有何解决办法？
2：关键步骤中二甲苯的浸泡时间总是拿不准，看很多硕博论文的时间大多在5至10分钟。我在做的时候都控制在1分钟以内，但效果并不是很好。不知哪位大侠给解释一下如何控制时间。
3：最后一步石蜡包埋的时间过长，把卵巢组织从石蜡中取出来放在模中再倒上液态石蜡要持续2至3分钟，组织上原来粘附的石蜡都已冷却，虽然也能切，但总归是影响质量，不知如何解决。
以上是一部分内容，不知大家在制作的过程中还遇到过什么样的棘手问题，一起来讨论一下。
已经快两个月了，实在是快被这个实验弄疯狂了。
下图是成年鼠的（已经是最好的了）。后续制作不理想的图马上奉上，希望大家给予指正。
初生小鼠卵巢石蜡包埋制作的问题，交流交流
Frozen 10 4 01.jpg
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SCI我来了！！！
1楼 2014-08-16 15:42:58
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snoopytbw

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running113: 金币+1, 收到，昨天做了一下冰冻切片，效果的确不错。就是脱片有点严重。暂未想个好方法 2014-08-21 17:09:00
running113(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-23 20:27:41
引用回帖:
4楼: Originally posted by running113 at 2014-08-18 23:01:54
感谢3楼伙伴的建议。
二甲苯的时间已经缩至1分钟以内，但酒精的时间要多久才算是尽量短呢？
另外，冷冻切片对后期免疫组化、原位杂交或荧光有没有影响？（切片都没做好，后面的还没做，不太了解，见谅！）
...

冷切是最好的做切片方法，几乎没有啥影响。酒精脱水的时间这个不好说，其实也是自己把握，我们是把脱水时间弄小点然后把其中1，2个浓度跳过。但具体情况每次都不一样。有时候弄的不太好，会补几次。反正多做几个平行组有好处

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5楼2014-08-19 06:26:21
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snoopytbw

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7楼: Originally posted by running113 at 2014-08-22 15:27:24
收到，非常感谢！冷冻的速度比石蜡快多了。
估计是没用专用载玻片，原来的载玻片也没有处理。
...

我是稍微泡了下酸，洗净后烘干就用的。感觉还好用用的么，主要是把乱七八糟的杂质都洗掉。
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8楼2014-08-22 15:41:37
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running113

木虫 (著名写手)
感谢2楼（自已置顶一下），这个金币是怎么发的？！
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SCI我来了！！！
2楼2014-08-16 18:12:44
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snoopytbw

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running113(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:25:47
running113: 金币+1, 我又问的问题，不管回答与否，都感谢参与。对我的帮助很大。 2014-08-18 23:02:59
我们实验室以前有人做卵巢早衰的，基本上都不做石蜡包埋，极其难做。一半多收集几个，直接做冷冻。石蜡也可以做但是建议你买个好一点的解剖镜，在镜下操作会好一点，不然要弄丢了，我们是做一个微小型包块。二甲苯那一步尽量短一点。另外前面固定用的多聚甲醛最好浓度高一点。酒精脱水最好尽量缩短时间。
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3楼2014-08-16 22:39:44
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running113

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-16 22:39:44
我们实验室以前有人做卵巢早衰的，基本上都不做石蜡包埋，极其难做。一半多收集几个，直接做冷冻。石蜡也可以做但是建议你买个好一点的解剖镜，在镜下操作会好一点，不然要弄丢了，我们是做一个微小型包块。二甲苯那 ...

感谢3楼伙伴的建议。
二甲苯的时间已经缩至1分钟以内，但酒精的时间要多久才算是尽量短呢？
另外，冷冻切片对后期免疫组化、原位杂交或荧光有没有影响？（切片都没做好，后面的还没做，不太了解，见谅！）
可否提供关于冷冻切片的资料！？
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SCI我来了！！！
4楼2014-08-18 23:01:54
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snoopytbw

荣誉版主 (著名写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
哎，脱片的话，我估计跟冷冻时间和温度有关，是不是切的太厚了或者太薄了呢。好好摸索下，每种组织的情况都不一样。冷冻切片有时候要求比石蜡还高，熟练工才行啊。慢慢练习
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6楼2014-08-22 11:20:45
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running113

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-22 11:20:45
哎，脱片的话，我估计跟冷冻时间和温度有关，是不是切的太厚了或者太薄了呢。好好摸索下，每种组织的情况都不一样。冷冻切片有时候要求比石蜡还高，熟练工才行啊。慢慢练习

收到，非常感谢！冷冻的速度比石蜡快多了。
估计是没用专用载玻片，原来的载玻片也没有处理。

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SCI我来了！！！
7楼2014-08-22 15:27:24
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running113

木虫 (著名写手)
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8楼: Originally posted by snoopytbw at 2014-08-22 15:41:37
我是稍微泡了下酸，洗净后烘干就用的。感觉还好用用的么，主要是把乱七八糟的杂质都洗掉。
不知还有其他资料没有？，再次感谢。...

泡酸烘干能防脱片（免疫组化和原味杂交）么？
请问泡酸用的是哪种酸？我回去试一试。

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SCI我来了！！！
9楼2014-08-23 11:41:39
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running113

木虫 (著名写手)
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9楼: Originally posted by running113 at 2014-08-23 11:41:39
泡酸烘干能防脱片（免疫组化和原味杂交）么？
请问泡酸用的是哪种酸？我回去试一试。

...

不知有没有成型的参考资料。

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SCI我来了！！！
10楼2014-08-23 11:43:15
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