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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 基因组跑胶
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bswhan

铜虫 (初入文坛)

[求助] 基因组跑胶 已有4人参与

求助我的基因组跑成这样是啥原因啊？之前提的没有问题，近期老是这样，PCR也会出现杂带，望大神帮帮忙，谢谢

基因组跑胶
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1楼 2014-08-14 23:57:27
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a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:29:23
bswhan: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-29 15:48:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by bswhan at 2014-08-15 10:29:24
你好，我是用试剂盒提的基因组，之前的操作都没有换过，你说的酚仿抽提具体的操作，能详细告诉我吗...

一般用的是酚：氯仿：异丙醇为25：24：1（v/v），和提的基因组DNA等体积混合，10000转离心5min，取上清，重复一次，向上清中加入1/10体积的3M pH=5.2的醋酸钠，再加入2.5倍体积纯酒精，-20度冰冻1h，14000r/min冷冻离心10min，得到的沉淀就是你的DNA，把沉淀DNA用70%的酒精洗2遍，挥发酒精后的基因组DNA纯度就很高了！
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7楼2014-08-15 15:59:41
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普通回帖

a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:00:15
基因组不纯,因为你的Marker正常，但是基因组有拖尾，里面的蛋白，多糖没除干净，你把你的基因组用酚仿抽提几遍就好了！
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bswhan
2楼2014-08-15 01:16:17
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:00:26
之前提的没有问题，说明操作上问题不大，那就可能是菌体老化或者提取试剂出了问题，试剂的问题多数会出在菌体裂解部分。
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bswhan
3楼2014-08-15 08:57:43
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bswhan

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 01:16:17
基因组不纯,因为你的Marker正常，但是基因组有拖尾，里面的蛋白，多糖没除干净，你把你的基因组用酚仿抽提几遍就好了！

你好，我是用试剂盒提的基因组，之前的操作都没有换过，你说的酚仿抽提具体的操作，能详细告诉我吗
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4楼2014-08-15 10:29:24
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bswhan

铜虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小豆子J at 2014-08-15 08:57:43
之前提的没有问题，说明操作上问题不大，那就可能是菌体老化或者提取试剂出了问题，试剂的问题多数会出在菌体裂解部分。

菌体老化，我这边用的菌应该30度培养，我37度培养的，12个小时后用的，影响会很大吗？裂解剂我用的自己配的溶菌酶，也是刚配的，问题应该不是很大。我用这次的基因组PCR产物，除了主带，还有好几个条带，之前没有这样的问题的，我应该从哪里找原因呢
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5楼2014-08-15 10:32:16
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:00:39
你好！从图上看，点样空位置很干净，你有没有测OD値？
PCR产物有问题，引物用的是以前的吗？
你没有阳性对照，阳性对照PCR结果怎么样？
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6楼2014-08-15 11:15:56
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bswhan

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 15:59:41
一般用的是酚：氯仿：异丙醇为25：24：1（v/v），和提的基因组DNA等体积混合，10000转离心5min，取上清，重复一次，向上清中加入1/10体积的3M pH=5.2的醋酸钠，再加入2.5倍体积纯酒精，-20度冰冻1h，14000r/min冷冻 ...

非常感谢
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8楼2014-08-15 18:48:17
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nl2016

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个基因组DNA提的挺好的呀，就是样品浓度太高了！
PCR有杂带，建议适当稀释DNA模板后再做PCR!
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bswhan
9楼2014-08-16 10:02:57
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bswhan

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 15:59:41
一般用的是酚：氯仿：异丙醇为25：24：1（v/v），和提的基因组DNA等体积混合，10000转离心5min，取上清，重复一次，向上清中加入1/10体积的3M pH=5.2的醋酸钠，再加入2.5倍体积纯酒精，-20度冰冻1h，14000r/min冷冻 ...

大侠，可以留个联系方式吗？初入分子，实在不懂，谢谢
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10楼2014-08-16 20:31:47
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