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bswhan

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
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9楼: Originally posted by nl2016 at 2014-08-16 10:02:57
这个基因组DNA提的挺好的呀,就是样品浓度太高了!
PCR有杂带,建议适当稀释DNA模板后再做PCR!

奥,谢谢你,能留个联系方式吗?初入分子,什么也不懂
11楼2014-08-16 21:28:18
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bswhan

铜虫 (初入文坛)

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6楼: Originally posted by happydove at 2014-08-15 11:15:56
你好!从图上看,点样空位置很干净,你有没有测OD値?
PCR产物有问题,引物用的是以前的吗?
你没有阳性对照,阳性对照PCR结果怎么样?

你没有阳性对照,阳性对照PCR结果怎么样?
这是什么意思,不太懂,PCR我没做过对照
引物我用的是之前的,所以PCR的条件都没有改变过,OD以前测过这次没测
12楼2014-08-16 21:30:24
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a50044758

银虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by bswhan at 2014-08-16 20:31:47
大侠,可以留个联系方式吗?初入分子,实在不懂,谢谢...

我Q:261496208
13楼2014-08-17 13:53:51
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小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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5楼: Originally posted by bswhan at 2014-08-15 10:32:16
菌体老化,我这边用的菌应该30度培养,我37度培养的,12个小时后用的,影响会很大吗?裂解剂我用的自己配的溶菌酶,也是刚配的,问题应该不是很大。我用这次的基因组PCR产物,除了主带,还有好几个条带,之前没有这 ...

37℃培养菌体形态会有变化,对提基因组的影响不太清楚,除了溶菌酶,蛋白酶k一样重要,还有菌体量不要太多,免得裂解不完。PCR有杂带就像楼下说的,模板加少点试试。
14楼2014-08-21 11:26:26
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bswhan

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 15:59:41
一般用的是酚:氯仿:异丙醇为25:24:1(v/v),和提的基因组DNA等体积混合,10000转离心5min,取上清,重复一次,向上清中加入1/10体积的3M pH=5.2的醋酸钠,再加入2.5倍体积纯酒精,-20度冰冻1h,14000r/min冷冻 ...

你好,这个方法可以用来纯化PCR产物吗
15楼2014-08-29 16:03:02
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a50044758

银虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by bswhan at 2014-08-29 16:03:02
你好,这个方法可以用来纯化PCR产物吗...

可以,只要是DNA都可以!如果有条件的话,最好在用70%酒精沉淀DNA的时候加一点糖原!
16楼2014-08-30 14:37:55
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小米不爱

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 15:59:41
一般用的是酚:氯仿:异丙醇为25:24:1(v/v),和提的基因组DNA等体积混合,10000转离心5min,取上清,重复一次,向上清中加入1/10体积的3M pH=5.2的醋酸钠,再加入2.5倍体积纯酒精,-20度冰冻1h,14000r/min冷冻 ...

请问,酚指的是什么酚?
17楼2018-04-13 12:08:01
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