24小时热门版块排行榜    

查看: 5052  |  回复: 16
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bswhan

铜虫 (初入文坛)

[求助] 基因组跑胶 已有4人参与

求助我的基因组跑成这样是啥原因啊?之前提的没有问题,近期老是这样,PCR也会出现杂带,望大神帮帮忙,谢谢

基因组跑胶
HS]6XD%EE6]}DAYL(L07`}4.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-08-17 20:29:23
bswhan: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-08-29 15:48:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by bswhan at 2014-08-15 10:29:24
你好,我是用试剂盒提的基因组,之前的操作都没有换过,你说的酚仿抽提具体的操作,能详细告诉我吗...

一般用的是酚:氯仿:异丙醇为25:24:1(v/v),和提的基因组DNA等体积混合,10000转离心5min,取上清,重复一次,向上清中加入1/10体积的3M pH=5.2的醋酸钠,再加入2.5倍体积纯酒精,-20度冰冻1h,14000r/min冷冻离心10min,得到的沉淀就是你的DNA,把沉淀DNA用70%的酒精洗2遍,挥发酒精后的基因组DNA纯度就很高了!
7楼2014-08-15 15:59:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

a50044758

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:00:15
基因组不纯,因为你的Marker正常,但是基因组有拖尾,里面的蛋白,多糖没除干净,你把你的基因组用酚仿抽提几遍就好了!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2014-08-15 01:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小豆子J

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bswhan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-15 13:00:26
之前提的没有问题,说明操作上问题不大,那就可能是菌体老化或者提取试剂出了问题,试剂的问题多数会出在菌体裂解部分。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-08-15 08:57:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bswhan

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-15 01:16:17
基因组不纯,因为你的Marker正常,但是基因组有拖尾,里面的蛋白,多糖没除干净,你把你的基因组用酚仿抽提几遍就好了!

你好,我是用试剂盒提的基因组,之前的操作都没有换过,你说的酚仿抽提具体的操作,能详细告诉我吗
4楼2014-08-15 10:29:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见