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huangrui5036

金虫 (小有名气)

[求助] 定量测定芽孢 已有4人参与

各位高手们,做实验遇到一个问题:
酵母浸粉中疑似有10~20cfu/g芽孢,现在要定量测定里面的芽孢数。按照网上的平板菌落计数法,取1g加9mL无菌水,95℃灭活活菌,再稀释成不同浓度梯度,涂平板计数。但是我用这种方法做出来一个菌落都没有,这种方法存在一个问题就是,样品中的芽孢不一定是均匀分布,取的1g样品中有可能一个都没有,就算是有,最终在涂平板的时候也是取的其中一部分(200μL),这一步骤有可能再次漏取。因为不是纯培养,菌落数很少,是不是平板菌落计数法不合适,各位高手还有没有更好的办法,在线等!
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RuyangHan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
稀释后涂板我觉得没问题,问题在于: 1. 其中的芽孢可能不能生长于你的固体培养基中;2. 95C也可能杀死芽孢的,所以导致你的平板长不出菌落。要是光是想计数,不如直接镜检,在相差显微镜下芽孢是透亮的。
2楼2014-08-14 13:18:11
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by RuyangHan at 2014-08-14 13:18:11
稀释后涂板我觉得没问题,问题在于: 1. 其中的芽孢可能不能生长于你的固体培养基中;2. 95C也可能杀死芽孢的,所以导致你的平板长不出菌落。要是光是想计数,不如直接镜检,在相差显微镜下芽孢是透亮的。

1、平板培养基用的LB,是什么芽孢无从得知;
2、没有相差显微镜,如果用普通显微镜染色不好区分也不好计数
一起学习,一起进步
3楼2014-08-14 14:30:21
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ahxalg3211

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我晕。你都说了可能10-20cfu/g了,还取1g加9ml,稀释,取0.2ml涂布。平板上如果上能长出菌落来,那和你的估计值岂不是相差万里了。
4楼2014-08-14 14:33:41
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swnz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
huangrui5036: 金币+20, ★★★很有帮助, 嗯,后来又做了一次,是按你的做法做的,只是没有加琼脂,记的总数,谢谢啦,也谢谢其他热心的虫友 2014-08-20 12:05:18
建议你用无菌的三角瓶在80度十分钟处理样品(1g加10ml无菌水),而且瓶壁上不要沾上样品。趁热加入70度左右的2%LB琼脂至50ml左右。摇匀,倒两到三个平板。这是混菌法。计总数。还可以做重复。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
跟着感觉走
5楼2014-08-15 07:32:26
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陈_劼_翔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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估计值这么低,怎么估计出的?溶解后直接镜检是很难很难找到的。至于平板,即便是上面长了菌,能判断是样品中的?你的样品没接触过外界空气?整个操作全程无菌?
这是签名~
6楼2014-08-15 10:22:19
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