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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 定量测定芽孢
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huangrui5036

金虫 (小有名气)

[求助] 定量测定芽孢 已有4人参与

各位高手们，做实验遇到一个问题：
酵母浸粉中疑似有10~20cfu/g芽孢，现在要定量测定里面的芽孢数。按照网上的平板菌落计数法，取1g加9mL无菌水，95℃灭活活菌，再稀释成不同浓度梯度，涂平板计数。但是我用这种方法做出来一个菌落都没有，这种方法存在一个问题就是，样品中的芽孢不一定是均匀分布，取的1g样品中有可能一个都没有，就算是有，最终在涂平板的时候也是取的其中一部分（200μL），这一步骤有可能再次漏取。因为不是纯培养，菌落数很少，是不是平板菌落计数法不合适，各位高手还有没有更好的办法，在线等！
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一起学习，一起进步
1楼 2014-08-14 12:01:21
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RuyangHan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
稀释后涂板我觉得没问题，问题在于： 1. 其中的芽孢可能不能生长于你的固体培养基中；2. 95C也可能杀死芽孢的，所以导致你的平板长不出菌落。要是光是想计数，不如直接镜检，在相差显微镜下芽孢是透亮的。
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2楼2014-08-14 13:18:11
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huangrui5036

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by RuyangHan at 2014-08-14 13:18:11
稀释后涂板我觉得没问题，问题在于： 1. 其中的芽孢可能不能生长于你的固体培养基中；2. 95C也可能杀死芽孢的，所以导致你的平板长不出菌落。要是光是想计数，不如直接镜检，在相差显微镜下芽孢是透亮的。

1、平板培养基用的LB，是什么芽孢无从得知；
2、没有相差显微镜，如果用普通显微镜染色不好区分也不好计数
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一起学习，一起进步
3楼2014-08-14 14:30:21
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ahxalg3211

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我晕。你都说了可能10-20cfu/g了，还取1g加9ml，稀释，取0.2ml涂布。平板上如果上能长出菌落来，那和你的估计值岂不是相差万里了。
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4楼2014-08-14 14:33:41
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swnz

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
huangrui5036: 金币+20, ★★★很有帮助, 嗯，后来又做了一次，是按你的做法做的，只是没有加琼脂，记的总数，谢谢啦，也谢谢其他热心的虫友 2014-08-20 12:05:18
建议你用无菌的三角瓶在80度十分钟处理样品(1g加10ml无菌水)，而且瓶壁上不要沾上样品。趁热加入70度左右的2%LB琼脂至50ml左右。摇匀，倒两到三个平板。这是混菌法。计总数。还可以做重复。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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跟着感觉走
5楼2014-08-15 07:32:26
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陈_劼_翔

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
估计值这么低，怎么估计出的？溶解后直接镜检是很难很难找到的。至于平板，即便是上面长了菌，能判断是样品中的？你的样品没接触过外界空气？整个操作全程无菌？
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这是签名~
6楼2014-08-15 10:22:19
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