24小时热门版块排行榜    

查看: 5302  |  回复: 30
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

[求助] 自己设计了一对较完美的引物,为什么却始终跑不出条带呢? 已有7人参与

前段时间,我在Primer上设计的引物,上游为:5-GATGTAGTTATGGTGCTTAGACGC-3.下游引物:5-ACGAACCAGCCATTGACG-3,引物合成单上显示上游引物TM值为55.7度,下游因为TM值为50.9度。我设置的温度梯度从43℃~60℃,但均未跑出条带。但用我同学在同一毒株上设计的引物则能跑出条带。能排除的原因我都排除了,现在真不知道问题出在哪里?恳请各位亲帮我分析分析,提提建议,我实在没有办法了!我在此谢谢大家了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
27楼: Originally posted by 谈笑之夜 at 2014-08-09 20:39:09
我得告诉您,用SYBR greenI法进行荧光定量PCR的产物一般不要超过300bp.通常SYBRgreenI说明书对引物的设计要求为50-150bp.但有时短了不容易设计,所以一般不超300bp.所以没产物很正常。...

嗯嗯,我用的荧光探针。只能一步一步克服困难了!
28楼2014-08-10 22:00:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 31 个回答

ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
胡琴HuQin(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-06 09:22:24
1、感觉你这对引物很容易形成二聚体。
2、设计引物时有没有把反向引物顺序弄反了(应该是互补链的顺序)?
2楼2014-08-06 07:47:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

胡琴HuQin

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-08-06 07:47:08
1、感觉你这对引物很容易形成二聚体。
2、设计引物时有没有把反向引物顺序弄反了(应该是互补链的顺序)?

这是引物设计的截图。我应该没有弄错顺序~
自己设计了一对较完美的引物,为什么却始终跑不出条带呢?
引物设计图片.png

3楼2014-08-06 09:47:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wszl666

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
胡琴HuQin: 金币+1 2014-08-07 21:33:11
没啥纠结的,换引物试试,换酶都可以,换条件
基因敲除
4楼2014-08-06 10:47:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见