24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
查看: 1699  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

清逸凌风

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取问题,都快1个月了,求解决了啊?已有4人参与

将别人给的质粒
(不知道抗性、序列,只知道里面有我需要的目的基因片段。抗性的确定我是分别把转化的感受态细胞分别涂到含有A、C、K的平板上,结果A和K的板子长了,然后转点到A+K的平板上,也长了,提取质粒。)导入DH5@中进行扩展,然后用质粒提取试剂盒提取质粒(试剂盒没有问题,实验室别人都能正常提取出来),浓度大概在100ng/ul左右。

下一步就是验证,将别人给的质粒和自己提取的质粒进行电泳验证,结果如下:

分析:明显我提取出来的质粒和别人给的质粒结果差别很大

我的问题:是否这个质粒不适宜DH5@菌株里面扩增,还有最上面的条带是什么?基因组?RNA?为什么我把纯质粒导进去,提出来成这样了,按理说质粒的转化效率还是很高的啊。


为了进一步验证我接下来有了单酶切3h两个质粒,跑胶,结果如下:
marker后Lane1:别人的质粒单酶切结果
              Lane2:自己的质粒酶切

综上:我的困惑时怎么样扩增别人的质粒,样品越来越少了,都快1个月,各种纠结啊,有没有大神也遇到这样的问题,求解决啊,金币多多的?

质粒提取问题,都快1个月了,求解决了啊?
质粒跑胶图


质粒提取问题,都快1个月了,求解决了啊?-1
酶切结果图
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清逸凌风(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-01 10:35:08
你们用试剂盒提的质粒效果都有模糊,不是很好。     
你现在的目的是为了得到你的目的片段,不是为了大批量扩增体质,因为你即使扩的再多再好,也没用。因为你不知道他两端的酶切位点,而且对你不一定用得上。
个人建议同6.7楼,赶紧设计引物扩增出来继续做你的实验,不然就真浪费时间了,不要走入了误区。
8楼2014-07-31 15:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

清逸凌风

金虫 (小有名气)

自己顶,在线等,现在所有的实验都不做了,就等结果了…………………………
2楼2014-07-30 15:47:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清逸凌风

金虫 (小有名气)

咋么都没有人呢?
3楼2014-07-30 16:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xy656691

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-07-30 16:49:08
1,你不知道载体序列,你知道多克隆位点的序列吗?如果不知道,你做酶切时是根据什么选择的内切酶?
2,图片一中“实验室同一批次提取的质粒跑胶”,从这个图片来看质粒提取的应该不好,条带应该是单一的。
3,别人给的质粒,你就再问一次抗性,或者载体的名称吧。
4楼2014-07-30 16:23:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见