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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提取问题，都快1个月了，求解决了啊？
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清逸凌风

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取问题，都快1个月了，求解决了啊？ 已有4人参与

将别人给的质粒
（不知道抗性、序列，只知道里面有我需要的目的基因片段。抗性的确定我是分别把转化的感受态细胞分别涂到含有A、C、K的平板上，结果A和K的板子长了，然后转点到A+K的平板上，也长了，提取质粒。）导入DH5@中进行扩展，然后用质粒提取试剂盒提取质粒（试剂盒没有问题，实验室别人都能正常提取出来），浓度大概在100ng/ul左右。

下一步就是验证，将别人给的质粒和自己提取的质粒进行电泳验证，结果如下：

分析：明显我提取出来的质粒和别人给的质粒结果差别很大

我的问题：是否这个质粒不适宜DH5@菌株里面扩增，还有最上面的条带是什么？基因组？RNA？为什么我把纯质粒导进去，提出来成这样了，按理说质粒的转化效率还是很高的啊。


为了进一步验证我接下来有了单酶切3h两个质粒，跑胶，结果如下：
marker后Lane1:别人的质粒单酶切结果
              Lane2：自己的质粒酶切

综上：我的困惑时怎么样扩增别人的质粒，样品越来越少了，都快1个月，各种纠结啊，有没有大神也遇到这样的问题，求解决啊，金币多多的？

质粒提取问题，都快1个月了，求解决了啊？
质粒跑胶图


质粒提取问题，都快1个月了，求解决了啊？-1
酶切结果图
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1楼 2014-07-30 15:44:24
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清逸凌风

金虫 (小有名气)
咋么都没有人呢？
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3楼2014-07-30 16:09:05
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清逸凌风

金虫 (小有名气)
自己顶，在线等，现在所有的实验都不做了，就等结果了…………………………
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2楼2014-07-30 15:47:00
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xy656691

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-30 16:49:08
1，你不知道载体序列，你知道多克隆位点的序列吗？如果不知道，你做酶切时是根据什么选择的内切酶？
2，图片一中“实验室同一批次提取的质粒跑胶”，从这个图片来看质粒提取的应该不好，条带应该是单一的。
3，别人给的质粒，你就再问一次抗性，或者载体的名称吧。
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-30 16:23:17
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清逸凌风

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xy656691 at 2014-07-30 16:23:17
1，你不知道载体序列，你知道多克隆位点的序列吗？如果不知道，你做酶切时是根据什么选择的内切酶？
2，图片一中“实验室同一批次提取的质粒跑胶”，从这个图片来看质粒提取的应该不好，条带应该是单一的。
3，别 ...

1.质粒上面有我要的基因，该基因的序列我是知道的，酶切位点的选择就有依据了。
2、没有酶切的质粒跑胶，出现四个条带之正常的，存在线性，开环换装和超螺旋的质粒。
3、如果别人说了抗性的话，我就不会花那么大的功夫做这些无用功的，关键给质粒的人死活不说，我也没办法，只能这样。

谢谢你的回复，真心感谢！！！！
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5楼2014-07-30 19:44:58
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