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dy_414

木虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-30 20:11:04
请问你有相关的文献证明pET28a表达效率低吗?...

个人经验,很难找到有文献专门比较载体表达效率的,因为不同载体适用于不同片段
我坚信,rp是攒出来的
11楼2014-07-31 22:57:54
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

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11楼: Originally posted by dy_414 at 2014-07-31 22:57:54
个人经验,很难找到有文献专门比较载体表达效率的,因为不同载体适用于不同片段...

那为什么同一个基因,全长连这个载体不表达,截掉一段后连这个载体就表达了?求相关与稀有密码子无关的文献
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
12楼2014-08-01 09:03:13
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dy_414

木虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-08-01 23:54:48
引用回帖:
12楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-31 20:03:13
那为什么同一个基因,全长连这个载体不表达,截掉一段后连这个载体就表达了?求相关与稀有密码子无关的文献...

我个人推断,首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多,所以原核表达不易;第二可能是跨膜区,(这个也算第一条);第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配;第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。
我坚信,rp是攒出来的
13楼2014-08-01 22:51:01
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
13楼: Originally posted by dy_414 at 2014-08-01 22:51:01
我个人推断,首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多,所以原核表达不易;第二可能是跨膜区,(这个也算第一条);第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配;第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。...

没有相关的文献讲到这个原因吗?我需要文献
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
14楼2014-08-02 10:35:12
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mmojf

新虫 (初入文坛)

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5楼: Originally posted by kuaile5420 at 2014-07-30 15:49:37
你好,冒昧的问一下,你昨晚转化之后有没有进行鉴定来确定是否转化成功?

鉴定过,酶切没问题,PCR没问题,测序都是百分百全对。
15楼2014-08-04 15:01:53
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mmojf

新虫 (初入文坛)

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13楼: Originally posted by dy_414 at 2014-08-01 22:51:01
我个人推断,首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多,所以原核表达不易;第二可能是跨膜区,(这个也算第一条);第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配;第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。...

首先,经软件分析,的确是亲水性较差,第二,跨膜区不知如何判断,第三,如果是错配,那么应该如何确认及解决;第四,是否应该用加入2%的glucose来解决这个问题?诱导浓度和诱导温度需要变化么?
16楼2014-08-04 15:08:06
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mmojf

新虫 (初入文坛)

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8楼: Originally posted by 小苹果168 at 2014-07-31 08:28:24
很多时候原核系统表达不了的蛋白,可以用真核系统表达

该段基因是来自于真核生物,是否这种情况说明这个蛋白无法进行原核表达?
17楼2014-08-04 15:10:10
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小苹果168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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17楼: Originally posted by mmojf at 2014-08-04 15:10:10
该段基因是来自于真核生物,是否这种情况说明这个蛋白无法进行原核表达?...

应该是吧,而且原核系统很难正确修饰糖基化,甲基化,真核表达的蛋白结构更接近天然蛋白结构

[ 发自小木虫客户端 ]
18楼2014-08-05 08:33:05
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小苹果168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by mmojf at 2014-08-04 15:10:10
该段基因是来自于真核生物,是否这种情况说明这个蛋白无法进行原核表达?...

应该是吧,而且原核系统很难正确修饰糖基化,甲基化,真核表达的蛋白结构更接近天然蛋白结构

[ 发自小木虫客户端 ]
19楼2014-08-05 08:34:58
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
mmojf(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-05 14:11:20
引用回帖:
15楼: Originally posted by mmojf at 2014-08-04 15:01:53
鉴定过,酶切没问题,PCR没问题,测序都是百分百全对。...

嗯,这样的话只有可能是表达系统的问题了,也可以对基因进行适当改造,让其高校表达,这里有一篇文章,也许对您有所帮助,http://wenku.baidu.com/view/9f255f8dcc22bcd126ff0cd4.html
坚持到底就是胜利!
20楼2014-08-05 08:37:59
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