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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 原核表达不表达
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-30 20:11:04
请问你有相关的文献证明pET28a表达效率低吗？...

个人经验，很难找到有文献专门比较载体表达效率的，因为不同载体适用于不同片段
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我坚信，rp是攒出来的
11楼2014-07-31 22:57:54
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
11楼: Originally posted by dy_414 at 2014-07-31 22:57:54
个人经验，很难找到有文献专门比较载体表达效率的，因为不同载体适用于不同片段...

那为什么同一个基因，全长连这个载体不表达，截掉一段后连这个载体就表达了？求相关与稀有密码子无关的文献
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
12楼2014-08-01 09:03:13
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dy_414

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-01 23:54:48
引用回帖:
12楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-31 20:03:13
那为什么同一个基因，全长连这个载体不表达，截掉一段后连这个载体就表达了？求相关与稀有密码子无关的文献...

我个人推断，首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多，所以原核表达不易；第二可能是跨膜区，（这个也算第一条）；第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配；第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。
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我坚信，rp是攒出来的
13楼2014-08-01 22:51:01
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
13楼: Originally posted by dy_414 at 2014-08-01 22:51:01
我个人推断，首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多，所以原核表达不易；第二可能是跨膜区，（这个也算第一条）；第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配；第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。...

没有相关的文献讲到这个原因吗？我需要文献
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
14楼2014-08-02 10:35:12
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mmojf

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by kuaile5420 at 2014-07-30 15:49:37
你好，冒昧的问一下，你昨晚转化之后有没有进行鉴定来确定是否转化成功？

鉴定过，酶切没问题，PCR没问题，测序都是百分百全对。
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15楼2014-08-04 15:01:53
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mmojf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by dy_414 at 2014-08-01 22:51:01
我个人推断，首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多，所以原核表达不易；第二可能是跨膜区，（这个也算第一条）；第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配；第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。...

首先，经软件分析，的确是亲水性较差，第二，跨膜区不知如何判断，第三，如果是错配，那么应该如何确认及解决；第四，是否应该用加入2%的glucose来解决这个问题？诱导浓度和诱导温度需要变化么？
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16楼2014-08-04 15:08:06
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mmojf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小苹果168 at 2014-07-31 08:28:24
很多时候原核系统表达不了的蛋白，可以用真核系统表达

该段基因是来自于真核生物，是否这种情况说明这个蛋白无法进行原核表达？
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17楼2014-08-04 15:10:10
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小苹果168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by mmojf at 2014-08-04 15:10:10
该段基因是来自于真核生物，是否这种情况说明这个蛋白无法进行原核表达？...

应该是吧，而且原核系统很难正确修饰糖基化，甲基化，真核表达的蛋白结构更接近天然蛋白结构

[ 发自小木虫客户端 ]
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18楼2014-08-05 08:33:05
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小苹果168

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
17楼: Originally posted by mmojf at 2014-08-04 15:10:10
该段基因是来自于真核生物，是否这种情况说明这个蛋白无法进行原核表达？...

应该是吧，而且原核系统很难正确修饰糖基化，甲基化，真核表达的蛋白结构更接近天然蛋白结构

[ 发自小木虫客户端 ]
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19楼2014-08-05 08:34:58
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
mmojf(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-08-05 14:11:20
引用回帖:
15楼: Originally posted by mmojf at 2014-08-04 15:01:53
鉴定过，酶切没问题，PCR没问题，测序都是百分百全对。...

嗯，这样的话只有可能是表达系统的问题了，也可以对基因进行适当改造，让其高校表达，这里有一篇文章，也许对您有所帮助，http://wenku.baidu.com/view/9f255f8dcc22bcd126ff0cd4.html
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坚持到底就是胜利！
20楼2014-08-05 08:37:59
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