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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 原核表达不表达
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mmojf

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达不表达 已有6人参与

求助，刚开始做表达，目的是为了研究蛋白功能，但是在表达上就遇到了困难，RNA序列是1224bp，进行了在线稀有密码子分析和可溶性分析，结果如附件图：含有20几个稀有密码子，在大肠杆菌中“The input sequence has a 0.0 percent  chance of solubility  when overexpressed in  E. Coli.”；载体为PET28a，选择酶切位点分别为Ecor1和Hind3，表达感受态使用过BL21（DE3）和ROSETTA。蛋白不表达，应该怎样解决呢，求高手解答

原核表达不表达
可溶性.jpg


原核表达不表达-1
密码子.jpg
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1楼 2014-07-30 09:41:42
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dy_414

木虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-08-01 23:54:48
引用回帖:
12楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-07-31 20:03:13
那为什么同一个基因，全长连这个载体不表达，截掉一段后连这个载体就表达了？求相关与稀有密码子无关的文献...

我个人推断，首先是你truncate掉的序列疏水氨基酸比较多，所以原核表达不易；第二可能是跨膜区，（这个也算第一条）；第三可能有Cys导致半胱氨酸易错配；第四就是这段序列的domain有baterial toxicity。
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我坚信，rp是攒出来的
13楼2014-08-01 22:51:01
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小小cool

金虫 (正式写手)
用别的载体试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-07-30 10:34:22
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
顶楼上！果断换表达载体和表达菌株
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-30 13:26:16
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mmojf(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-31 08:56:18
不表达，实验方法没问题的话，有两个办法供选择：换其他载体和换其他表达系统。
祝你成功！
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4楼2014-07-30 15:48:04
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