24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2452  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

mmojf

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达不表达 已有6人参与

求助,刚开始做表达,目的是为了研究蛋白功能,但是在表达上就遇到了困难,RNA序列是1224bp,进行了在线稀有密码子分析和可溶性分析,结果如附件图:含有20几个稀有密码子,在大肠杆菌中“The input sequence has a 0.0 percent  chance of solubility  when overexpressed in  E. Coli.”;载体为PET28a,选择酶切位点分别为Ecor1和Hind3,表达感受态使用过BL21(DE3)和ROSETTA。蛋白不表达,应该怎样解决呢,求高手解答

原核表达不表达
可溶性.jpg


原核表达不表达-1
密码子.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

引用回帖:
11楼: Originally posted by dy_414 at 2014-07-31 22:57:54
个人经验,很难找到有文献专门比较载体表达效率的,因为不同载体适用于不同片段...

那为什么同一个基因,全长连这个载体不表达,截掉一段后连这个载体就表达了?求相关与稀有密码子无关的文献
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
12楼2014-08-01 09:03:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

小小cool

金虫 (正式写手)

用别的载体试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-07-30 10:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
顶楼上!果断换表达载体和表达菌株
3楼2014-07-30 13:26:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
mmojf(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-31 08:56:18
不表达,实验方法没问题的话,有两个办法供选择:换其他载体和换其他表达系统。
祝你成功!
4楼2014-07-30 15:48:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297,工科调剂? +3 河南农业大学-能 2026-04-14 3/150 2026-04-15 22:02 by noqvsozv
[考研] 284求调剂 +21 让我上岸吧阿西 2026-04-09 21/1050 2026-04-15 21:53 by noqvsozv
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 310求调剂 +16 666真好 2026-04-11 18/900 2026-04-15 13:28 by 黑科技矿业
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +26 慕绝cc 2026-04-09 30/1500 2026-04-14 18:50 by 蔡苏阳
[考研] 085600材料与化工329分求调剂 +24 叶zilin 2026-04-13 25/1250 2026-04-14 09:20 by 试管破裂
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 295分求调剂 +13 ?要上岸? 2026-04-10 13/650 2026-04-12 15:37 by laoshidan
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +7 0856?调剂 2026-04-10 7/350 2026-04-11 21:33 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +10 只叙离别辞 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:57 by 逆水乘风
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 296求调剂 +6 汪!?! 2026-04-09 6/300 2026-04-11 11:25 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +5 音像店听花鼓戏 2026-04-10 5/250 2026-04-11 10:49 by qingpingzhu
[考研] 309求调剂 +14 wdhw 2026-04-10 15/750 2026-04-10 21:06 by zhouxiaoyu
[考研] 计算机类求调剂,22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
请填处理意见