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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何鉴定一种DNA样本中的不同样本类型所占百分比
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linzshit

银虫 (小有名气)

[求助] 如何鉴定一种DNA样本中的不同样本类型所占百分比 已有3人参与

现在遇到一个技术难点，举个例子就是我混合两种不同的质粒A和B，质粒之间只存在一个点的差别，我用定量的方式确定两种质粒的浓度，然后进行混合，混合方式为A/(A+B)=5%，这里的百分比是浓度比。现在问题来了，对于混合后的样本，我想鉴定它到底是不是按我预想的混合成5%了，有什么方法吗？希望大神能够解答，谢谢
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1楼 2014-07-28 14:25:08
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-31 10:37:10
双标准曲线是我自己想的，我觉得通过标准曲线得到准确的扩增效率，通过校正(1+E)^CT后再除以扩增片段长度，也可以得到相同的效果，当然两个引物需要手动设置相同的阈值...

这种的我也试过，甚至试过通过最后的峰高、Ct值、扩增效率去推算初始模板量，不过感觉出入还是挺大的。
我想两种质粒的话一个点突变的区别，通过定量得到浓度然后去混合，这种混合结果应该是普遍被认可是正确的吧，如果是可以考虑说服上层不进行验证了，毕竟Qpcr也不一定能达到这种检测精度。
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15楼2014-07-31 11:10:07
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
linzshit(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:53:10
大神的不是 可以做soutern blot
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2楼2014-07-28 14:33:14
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柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
linzshit(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:53:18
southern探针都比较长，单个碱基突变似乎不好做
可以试试看QPCR的方法，把突变点设置为3'最后一个碱基
A引物扩增B的 B引物扩增A的 看看能否达到区分效果（看ct值差别大不大。。）
如果质粒量比较足的话，还可以试试酶切。。
不是大神的路过
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3楼2014-07-28 18:34:46
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linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-28 14:33:14
大神的不是 可以做soutern blot

southern的话是如何做到定量的啊，我需要精确定量到5%，这个能实现吗？
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4楼2014-07-29 09:16:46
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查看全部 18 个回答
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