应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 如何鉴定一种DNA样本中的不同样本类型所占百分比
52/1返回列表
查看: 2066  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

linzshit

银虫 (小有名气)

[求助] 如何鉴定一种DNA样本中的不同样本类型所占百分比 已有3人参与

现在遇到一个技术难点，举个例子就是我混合两种不同的质粒A和B，质粒之间只存在一个点的差别，我用定量的方式确定两种质粒的浓度，然后进行混合，混合方式为A/(A+B)=5%，这里的百分比是浓度比。现在问题来了，对于混合后的样本，我想鉴定它到底是不是按我预想的混合成5%了，有什么方法吗？希望大神能够解答，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-07-28 14:25:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 柠萌粉 at 2014-07-31 10:37:10
双标准曲线是我自己想的，我觉得通过标准曲线得到准确的扩增效率，通过校正(1+E)^CT后再除以扩增片段长度，也可以得到相同的效果，当然两个引物需要手动设置相同的阈值...

这种的我也试过，甚至试过通过最后的峰高、Ct值、扩增效率去推算初始模板量，不过感觉出入还是挺大的。
我想两种质粒的话一个点突变的区别，通过定量得到浓度然后去混合，这种混合结果应该是普遍被认可是正确的吧，如果是可以考虑说服上层不进行验证了，毕竟Qpcr也不一定能达到这种检测精度。
赞一下 回复此楼
15楼2014-07-31 11:10:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
linzshit(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:53:10
大神的不是 可以做soutern blot
赞一下 回复此楼
2楼2014-07-28 14:33:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柠萌粉

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
linzshit(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-29 11:53:18
southern探针都比较长，单个碱基突变似乎不好做
可以试试看QPCR的方法，把突变点设置为3'最后一个碱基
A引物扩增B的 B引物扩增A的 看看能否达到区分效果（看ct值差别大不大。。）
如果质粒量比较足的话，还可以试试酶切。。
不是大神的路过
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-28 18:34:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linzshit

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by songzuowei at 2014-07-28 14:33:14
大神的不是 可以做soutern blot

southern的话是如何做到定量的啊，我需要精确定量到5%，这个能实现吗？
赞一下 回复此楼
4楼2014-07-29 09:16:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 255求调剂 +3 李嘉慧， 2026-03-12 4/200 2026-03-14 16:58 by 有只狸奴
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭