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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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junrui

新虫 (初入文坛)

[交流] 巯基ssDNA连接纳米金的奇怪问题,已用离心和加Nacl方法测试 已有9人参与

大家好,我最近一直在尝试把巯基修饰的ssDNA链接到13nm的纳米金颗粒上。我先用Ka2CO3将柠三钠还原法制备的13nm纳米金溶液PH值调到9.5左右,加入微量PB稀释的抗体形成不饱和的AU-抗体复合物,静置2小时后直接加入巯基修饰的ssDNA,终浓度约为0.2uM,上摇床4度下12小时后取出。此时如果用1ml枪头反复缓慢吸打,大约几十次后会在枪头处形成如照片中的深黯红色痕迹。

为了检查ssDNA是否的确牢固地与Au连接形成Au-S共价结合,我取样后分成两组进行测试,且保留了一份未加DNA的纳米金(同样加了微量抗体)作为参照,并分别做了离心和加Nacl的对比。

当第一组上离心机10000rpm下10'后,发现无论是否加入DNA,所有的组别的底部都出现黑色聚集无法重悬,同时溶液中也存在有部分呈红色的完好纳米金。这应该表明ssDNA没有成功连接到Au上。
但是我在第二组中快速加入Nacl使终浓度达到0.3M时,发现未加DNA的那一份Au在1分钟内迅速变蓝,1小时左右完全变透明,溶液内有黑色聚集物,管壁上略有黑色吸附(照片中中间的EP管)。毫无疑问这就是Au聚集了的表现。
然而加了DNA的那一份Au溶液一开始没有变化,直到2小时左右,管壁上才开始逐渐出现红色吸附物,8小时后溶液变清,管壁上有大量的红色吸附物,且无法重悬。(照片中最左边的EP管)。所有的EP管都是进口的没有专门做硅化,但是加了DNA与未加DNA的表现有很大差异,这样的话,请教大家究竟ssDNA是成功连接上了Au呢?还是没有成功?有什么更好办法来确保连接成功呢?

谢谢大家了。

巯基ssDNA连接纳米金的奇怪问题,已用离心和加Nacl方法测试
照片 (2).JPG


巯基ssDNA连接纳米金的奇怪问题,已用离心和加Nacl方法测试-1
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巯基ssDNA连接纳米金的奇怪问题,已用离心和加Nacl方法测试-2
照片.JPG
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lucias

木虫 (小有名气)


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likedong1021: 感谢回帖交流!该帖被"生物材料版悬而未决问题集锦系列---- 2014年7月"收录,请到本版置顶帖中回帖并粘贴应助地址领币币 2014-08-21 15:43:07
建议金颗粒先用BSPP封闭,然后再接抗体,最后接SH-DNA。问题会迎刃而解!BSPP是个好东西,楼主可以尝试一下!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2014-08-21 15:35:26
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bggbg

铁杆木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
likedong1021: 应助指数+1, 感谢回帖交流!该帖被"生物材料版悬而未决问题集锦系列---- 2014年7月"收录,请到本版置顶帖中回帖并粘贴应助地址领币币 2014-08-05 04:01:39
如果知道你采用的ssDNA分子量,为何不跑个电泳看看修饰后的颗粒是否有特征吸收峰,另外楼主的金颗粒粘在管壁上了,说明水溶性在修饰以后变差了,以后应用的时候楼主还得想想办法给他改性
2楼2014-08-05 02:49:26
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lucias

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
此时如果用1ml枪头反复缓慢吸打,大约几十次后会在枪头处形成如照片中的深黯红色痕迹----------六次足够混匀!另外你这枪头质量也不行
4楼2014-08-21 15:37:29
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lucias

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
离心清洗时,要用到表面活性剂,溶液无盐,最后再加盐,直接进行下一步实验
5楼2014-08-21 15:39:32
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