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junrui

新虫 (初入文坛)

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[交流] 巯基ssDNA连接纳米金的奇怪问题，已用离心和加Nacl方法测试已有9人参与

大家好，我最近一直在尝试把巯基修饰的ssDNA链接到13nm的纳米金颗粒上。我先用Ka2CO3将柠三钠还原法制备的13nm纳米金溶液PH值调到9.5左右，加入微量PB稀释的抗体形成不饱和的AU－抗体复合物，静置2小时后直接加入巯基修饰的ssDNA，终浓度约为0.2uM，上摇床4度下12小时后取出。此时如果用1ml枪头反复缓慢吸打，大约几十次后会在枪头处形成如照片中的深黯红色痕迹。

为了检查ssDNA是否的确牢固地与Au连接形成Au-S共价结合，我取样后分成两组进行测试，且保留了一份未加DNA的纳米金(同样加了微量抗体)作为参照，并分别做了离心和加Nacl的对比。

当第一组上离心机10000rpm下10'后，发现无论是否加入DNA，所有的组别的底部都出现黑色聚集无法重悬，同时溶液中也存在有部分呈红色的完好纳米金。这应该表明ssDNA没有成功连接到Au上。
但是我在第二组中快速加入Nacl使终浓度达到0.3M时，发现未加DNA的那一份Au在1分钟内迅速变蓝，1小时左右完全变透明，溶液内有黑色聚集物，管壁上略有黑色吸附(照片中中间的EP管)。毫无疑问这就是Au聚集了的表现。
然而加了DNA的那一份Au溶液一开始没有变化，直到2小时左右，管壁上才开始逐渐出现红色吸附物，8小时后溶液变清，管壁上有大量的红色吸附物，且无法重悬。(照片中最左边的EP管)。所有的EP管都是进口的没有专门做硅化，但是加了DNA与未加DNA的表现有很大差异，这样的话，请教大家究竟ssDNA是成功连接上了Au呢？还是没有成功？有什么更好办法来确保连接成功呢？

谢谢大家了。

照片 (2).JPG

照片 (1).JPG

照片.JPG

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1楼2014-07-26 19:35:42

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templefire

金虫 (正式写手)

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专业: 应用高分子化学与物理

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

楼主其实没说清楚啊。。。为什么修饰的时候要加入抗体呢？是要把抗体修饰到金颗粒上么？还有DNA和抗原的比例是多少啊？光说微量完全没有办法判断到底是哪里出问题了。之前我也做过金颗粒修饰单链DNA的反应，建议的方法是先将DNA加入到没有加buffer的金颗粒溶液中，注意这个时候什么都不要加！过夜之后再加入buffer和0.1 M的氯化钠溶液让DNA上满。这个反应没有那么娇贵，所以不用在反应前调pH，容易把金颗粒弄沉。严重怀疑楼主的聚沉就是这么造成的。

建议楼主好好研究一下C. A. Merkin的工作，印象中他也做过修饰抗体的反应，他也有篇综述专门研究DNA上到金颗粒表面时的形态变化，会对你的实验非常有帮助。