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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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vivianvj

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 基因点突变高TM值,高GC比,怎么做 已有1人参与

做了两次点突变,转化之后都没长,引物TM值在71左右,GC比也在70多,请问该怎么解决?
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vivianvj

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-24 10:00:30
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗?
你的plamsid多大?72C延长时间足够否?多少扩增循环数?
最重要的,向扩增系统中加点DMSO试试看?

用fastpfu PCR  6000kd多 72度延伸6min   40个循环
3楼2014-07-24 10:07:13
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ssssllllnnnn

版主

Translator and Proofreader

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!


★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-24 11:20:34
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗?
你的plamsid多大?72C延长时间足够否?多少扩增循环数?
最重要的,向扩增系统中加点DMSO试试看?
2楼2014-07-24 10:00:30
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gyesang

新虫

引用回帖:
3楼: Originally posted by vivianvj at 2014-07-24 10:07:13
用fastpfu PCR  6000kd多 72度延伸6min   40个循环...

希望你能好好读下这个manual

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  • 附件 1 : QuikChangeSite-DirectedMutagenesiskit.pdf
  • 2014-07-24 16:27:14, 324.69 K
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-24 16:27:27
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小苹果168

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-08-21 16:11:24
可以用 GC buffer,针对GC含量高的基因进行PCR,我们实验室遇到这种情况就用这个的
5楼2014-07-29 08:56:21
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