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基因点突变高TM值,高GC比,怎么做
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vivianvj
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MM
专业: 基因表达调控与表观遗传学
[
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]
基因点突变高TM值,高GC比,怎么做
已有1人参与
做了两次点突变,转化之后都没长,引物TM值在71左右,GC比也在70多,请问该怎么解决?
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1楼
2014-07-24 09:54:17
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vivianvj
新虫
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虫号: 1020891
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专业: 基因表达调控与表观遗传学
引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
ssssllllnnnn
at 2014-07-24 10:00:30
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗?
你的plamsid多大?72C延长时间足够否?多少扩增循环数?
最重要的,向扩增系统中加点DMSO试试看?
用fastpfu PCR 6000kd多 72度延伸6min 40个循环
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3楼
2014-07-24 10:07:13
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ssssllllnnnn
至尊木虫
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2014-07-24 11:20:34
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗?
你的plamsid多大?72C延长时间足够否?多少扩增循环数?
最重要的,向扩增系统中加点DMSO试试看?
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2楼
2014-07-24 10:00:30
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gyesang
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分子生物
引用回帖:
3楼
:
Originally posted by
vivianvj
at 2014-07-24 10:07:13
用fastpfu PCR 6000kd多 72度延伸6min 40个循环...
希望你能好好读下这个manual
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QuikChangeSite-DirectedMutagenesiskit.pdf
2014-07-24 16:27:14, 324.69 K
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼
2014-07-24 16:27:27
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小苹果168
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专业: 细胞生物学
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验!
2014-08-21 16:11:24
可以用 GC buffer,针对GC含量高的基因进行PCR,我们实验室遇到这种情况就用这个的
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5楼
2014-07-29 08:56:21
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