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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因点突变高TM值，高GC比，怎么做
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vivianvj

新虫 (小有名气)

[求助] 基因点突变高TM值，高GC比，怎么做 已有1人参与

做了两次点突变，转化之后都没长，引物TM值在71左右，GC比也在70多，请问该怎么解决？
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1楼 2014-07-24 09:54:17
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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

Translator and Proofreader
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-24 11:20:34
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗？
你的plamsid多大？72C延长时间足够否？多少扩增循环数？
最重要的，向扩增系统中加点DMSO试试看？
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2楼2014-07-24 10:00:30
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vivianvj

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-24 10:00:30
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗？
你的plamsid多大？72C延长时间足够否？多少扩增循环数？
最重要的，向扩增系统中加点DMSO试试看？

用fastpfu PCR  6000kd多 72度延伸6min   40个循环
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3楼2014-07-24 10:07:13
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by vivianvj at 2014-07-24 10:07:13
用fastpfu PCR  6000kd多 72度延伸6min   40个循环...

希望你能好好读下这个manual
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    • 2014-07-24 16:27:14, 324.69 K
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-07-24 16:27:27
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小苹果168

银虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-08-21 16:11:24
可以用 GC buffer，针对GC含量高的基因进行PCR,我们实验室遇到这种情况就用这个的
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5楼2014-07-29 08:56:21
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hhz09423

金虫 (正式写手)
不知楼主，之后怎么做的？突变成功了吗？
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6楼2014-10-08 09:27:59
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