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vivianvj

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[求助] 基因点突变高TM值，高GC比，怎么做已有1人参与

做了两次点突变，转化之后都没长，引物TM值在71左右，GC比也在70多，请问该怎么解决？

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核酸生物学实验经验

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1楼 2014-07-24 09:54:17

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ssssllllnnnn

至尊木虫 (知名作家)

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-24 11:20:34

使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗？
你的plamsid多大？72C延长时间足够否？多少扩增循环数？
最重要的，向扩增系统中加点DMSO试试看？

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2楼2014-07-24 10:00:30

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vivianvj

新虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by ssssllllnnnn at 2014-07-24 10:00:30
使用QuikChange Site-directed mutagenesis kit吗？
你的plamsid多大？72C延长时间足够否？多少扩增循环数？
最重要的，向扩增系统中加点DMSO试试看？

用fastpfu PCR 6000kd多 72度延伸6min 40个循环

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3楼2014-07-24 10:07:13

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