应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌株酶活突然下降
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 1673  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

夏天的普洱茶

专家顾问

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

[求助] 菌株酶活突然下降 已有2人参与

将蛋白在大肠杆菌中进行表达，开始的时候表达量很好，酶活也很高，但是隔了一天再重新发酵，发酵条件完全一样，酶活降低了很多倍，各位虫友遇到过类似问题吗？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 重组的景区

» 猜你喜欢
1楼 2014-07-23 21:35:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:38:22
以下是几个方面的可能
1.你第二天重新发酵的菌的来源和第一次完全一样吗，甘油管？平板？还是第一次的菌转接的？
2.补加IPTG的时候菌体的OD值和第一次一样吗？
3.诱导后需要破碎细胞收集酶液吗？如果需要破碎，那你确定第二次破碎的成功吗？
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
2楼2014-07-23 22:28:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

超级版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-23 22:28:41
以下是几个方面的可能
1.你第二天重新发酵的菌的来源和第一次完全一样吗，甘油管？平板？还是第一次的菌转接的？
2.补加IPTG的时候菌体的OD值和第一次一样吗？
3.诱导后需要破碎细胞收集酶液吗？如果需要破碎，那 ...

1.第二天发酵的菌是第一天的菌在平板上划线分离得到的，我怀疑可能是这个原因，但是只传了一代，菌株不会退化的这么严重吧
2.诱导的时候OD基本一样，都在1.2左右
3.诱导后要细胞破碎，诱导时间一样，破碎条件一样，应该破碎程度一样的吧。
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-24 08:49:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-25 08:47:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-24 08:49:44
1.第二天发酵的菌是第一天的菌在平板上划线分离得到的，我怀疑可能是这个原因，但是只传了一代，菌株不会退化的这么严重吧
2.诱导的时候OD基本一样，都在1.2左右
3.诱导后要细胞破碎，诱导时间一样，破碎条件一样 ...

你第一天的菌用于划线的平板上带氨苄吗？如果没氨苄强烈建议再划一次线。那你第一次用于发酵的那个菌的单菌落还留着没有？如果还有直接用那个菌落再发酵一次，接菌前也不用划线，扎一个带氨苄的母版就可以了。如果能达到原来的水平立刻制备甘油管保存菌株。
赞一下 回复此楼
大家相互帮助哈
4楼2014-07-24 19:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你第二次发酵的种子液是不是在冰箱里放置过？
赞一下 回复此楼
勤奋、执着、专注，则无坚不破。
5楼2014-07-24 20:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
4楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-24 19:56:39
你第一天的菌用于划线的平板上带氨苄吗？如果没氨苄强烈建议再划一次线。那你第一次用于发酵的那个菌的单菌落还留着没有？如果还有直接用那个菌落再发酵一次，接菌前也不用划线，扎一个带氨苄的母版就可以了。如果 ...

加抗生素了，第一次的菌保留了，昨天重新发酵了一次，今天测酶活也下降了。
赞一下 回复此楼
6楼2014-07-24 21:52:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

主管区长

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
5楼: Originally posted by gjs713 at 2014-07-24 20:24:07
你第二次发酵的种子液是不是在冰箱里放置过？

种子液没有，我都是挑菌落活化，然后再接种发酵的
赞一下 回复此楼
7楼2014-07-24 21:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
★
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-07-25 08:46:50
引用回帖:
7楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-24 21:52:35
种子液没有，我都是挑菌落活化，然后再接种发酵的...

这个情况我也碰到过。你就涂布平板  然后多挑几个  筛一下看看，选酶活高的。。最后如果还是不行的话，有一个笨但是却十分可行的办法，你拿质粒重新转化表达宿主，酶活肯定恢复，反正做起来也快 一天一夜
赞一下 回复此楼
勤奋、执着、专注，则无坚不破。
8楼2014-07-24 23:49:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夏天的普洱茶

版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！
引用回帖:
8楼: Originally posted by gjs713 at 2014-07-24 23:49:09
这个情况我也碰到过。你就涂布平板  然后多挑几个  筛一下看看，选酶活高的。。最后如果还是不行的话，有一个笨但是却十分可行的办法，你拿质粒重新转化表达宿主，酶活肯定恢复，反正做起来也快 一天一夜...

好的，谢谢，我做诱导时间优化遇到了这种情况，超级郁闷，熬了通宵发现酶活降了很多。对于构建好的工程菌你每次发酵都是用什么接种的呢？
赞一下 回复此楼
9楼2014-07-25 09:29:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

实习版主

优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！优秀！！有木有！！！

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-07-25 13:54:56
引用回帖:
9楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-25 09:29:27
好的，谢谢，我做诱导时间优化遇到了这种情况，超级郁闷，熬了通宵发现酶活降了很多。对于构建好的工程菌你每次发酵都是用什么接种的呢？...

我的是平板 斜面 甘油管都保存。平时用甘油管用的比较多。对于工程菌 就得做多手准备。给你提个建议：你构建好的重组质粒一定要保存好，其他的都无所谓。菌种出现问题随时可以重新转化构建
赞一下 回复此楼
勤奋、执着、专注，则无坚不破。
10楼2014-07-25 09:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 夏天的普洱茶 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-03-31 13/650 2026-04-01 11:17 by 逆水乘风
[考研] 284求调剂 +11 小熊～～ 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:13 by 逆水乘风
[考研] 一志愿华南师范361分，化学求调剂 +4 Nicole88888 2026-04-01 4/200 2026-04-01 10:08 by 唐沐儿
[考研] 0805求调剂 +6 是水分 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:05 by oooqiao
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 化学308分调剂 +11 你好明天你好 2026-03-30 12/600 2026-03-31 19:14 by 杨金金金
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 8/400 2026-03-31 18:43 by 6266jl
[考研] 285求调剂 +6 AZMK 2026-03-30 11/550 2026-03-31 17:33 by AZMK
[考研] 材料专硕调剂 +13 椰椰。 2026-03-29 13/650 2026-03-31 16:37 by hypershenger
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +10 倾____萧 2026-03-27 11/550 2026-03-31 14:32 by fmesaito
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +6 大馋小子 2026-03-29 6/300 2026-03-31 10:03 by 氯化亚硝酰
[考研] 323分 食品与营养调剂 +3 嘿ooo 2026-03-31 3/150 2026-03-31 09:38 by longlotian
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 332求调剂 +14 032500 2026-03-25 14/700 2026-03-30 20:03 by 无际的草原
[考研] 304材料求调剂 +5 钟llll 2026-03-26 5/250 2026-03-30 19:37 by 源_2020
[考研] 一志愿厦门大学材料工程专硕354找调剂！！！ +5 贝呗钡钡 2026-03-30 5/250 2026-03-30 18:16 by 无际的草原
[考研] 332求调剂 +6 Lyy930824@ 2026-03-29 6/300 2026-03-30 10:53 by 1172367218
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +12 大馋小子 2026-03-27 13/650 2026-03-28 10:56 by self2008
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭