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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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夏天的普洱茶

兑换贵宾

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[求助] 菌株酶活突然下降 已有2人参与

将蛋白在大肠杆菌中进行表达,开始的时候表达量很好,酶活也很高,但是隔了一天再重新发酵,发酵条件完全一样,酶活降低了很多倍,各位虫友遇到过类似问题吗?
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夏天的普洱茶

专家顾问

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引用回帖:
5楼: Originally posted by gjs713 at 2014-07-24 20:24:07
你第二次发酵的种子液是不是在冰箱里放置过?

种子液没有,我都是挑菌落活化,然后再接种发酵的
7楼2014-07-24 21:52:35
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luwei13566

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:38:22
以下是几个方面的可能
1.你第二天重新发酵的菌的来源和第一次完全一样吗,甘油管?平板?还是第一次的菌转接的?
2.补加IPTG的时候菌体的OD值和第一次一样吗?
3.诱导后需要破碎细胞收集酶液吗?如果需要破碎,那你确定第二次破碎的成功吗?
大家相互帮助哈
2楼2014-07-23 22:28:41
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夏天的普洱茶

主管区长

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-23 22:28:41
以下是几个方面的可能
1.你第二天重新发酵的菌的来源和第一次完全一样吗,甘油管?平板?还是第一次的菌转接的?
2.补加IPTG的时候菌体的OD值和第一次一样吗?
3.诱导后需要破碎细胞收集酶液吗?如果需要破碎,那 ...

1.第二天发酵的菌是第一天的菌在平板上划线分离得到的,我怀疑可能是这个原因,但是只传了一代,菌株不会退化的这么严重吧
2.诱导的时候OD基本一样,都在1.2左右
3.诱导后要细胞破碎,诱导时间一样,破碎条件一样,应该破碎程度一样的吧。
3楼2014-07-24 08:49:44
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luwei13566

超级版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
夏天的普洱茶(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-25 08:47:10
引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2014-07-24 08:49:44
1.第二天发酵的菌是第一天的菌在平板上划线分离得到的,我怀疑可能是这个原因,但是只传了一代,菌株不会退化的这么严重吧
2.诱导的时候OD基本一样,都在1.2左右
3.诱导后要细胞破碎,诱导时间一样,破碎条件一样 ...

你第一天的菌用于划线的平板上带氨苄吗?如果没氨苄强烈建议再划一次线。那你第一次用于发酵的那个菌的单菌落还留着没有?如果还有直接用那个菌落再发酵一次,接菌前也不用划线,扎一个带氨苄的母版就可以了。如果能达到原来的水平立刻制备甘油管保存菌株。
大家相互帮助哈
4楼2014-07-24 19:56:39
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