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coffee159

金虫 (小有名气)

[求助] 起始密码子放在酶切位点前 已有2人参与

想要表达一批蛋白,但这些蛋白中都没有起始密码子,而我的载体上面也没有起始密码子,所以想要对载体进行改造下,在酶切位点BamHI前面插入起始密码子ATG。不知道这样是否可行,如果这样的话就在新的蛋白中引入了3个氨基酸,对蛋白是否有影响?
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luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by coffee159 at 2014-07-24 12:45:32
因为需要做的克隆比较多,所以就打算直接在载体的酶切位点前面加上ATG,谢谢啊...

我记得好像EcoR1里自带个ATG如果合适的话可以直接用

[ 发自小木虫客户端 ]
大家相互帮助哈
8楼2014-07-24 16:01:48
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
coffee159: 金币+1 2014-07-23 21:35:22
你确定没有起始密码子?那它怎么表达的?
2楼2014-07-23 21:33:29
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coffee159

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2014-07-23 21:33:29
你确定没有起始密码子?那它怎么表达的?

我要表达的是融合蛋白,前边是一段短肽,是没有起始密码子的
3楼2014-07-23 21:35:15
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
coffee159(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-07-24 09:53:12
起始密码子是肯定要加的,载体上没有你就得手动加上,你在你酶切位点前面加一个ATG引入了3个AA,而你在酶切位点后面加ATG就引进一个M,你说哪个更合适?
一般用载体导致N端或者C端多了几个AA这都是不可避免的,你表达出来的叫重组蛋白又不是原始的蛋白,一般不影响的。
大家相互帮助哈
4楼2014-07-23 22:03:07
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