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起始密码子放在酶切位点前
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coffee159
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起始密码子放在酶切位点前
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想要表达一批蛋白,但这些蛋白中都没有起始密码子,而我的载体上面也没有起始密码子,所以想要对载体进行改造下,在酶切位点BamHI前面插入起始密码子ATG。不知道这样是否可行,如果这样的话就在新的蛋白中引入了3个氨基酸,对蛋白是否有影响?
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1楼
2014-07-23 20:05:27
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4楼
:
Originally posted by
luwei13566
at 2014-07-23 22:03:07
起始密码子是肯定要加的,载体上没有你就得手动加上,你在你酶切位点前面加一个ATG引入了3个AA,而你在酶切位点后面加ATG就引进一个M,你说哪个更合适?
一般用载体导致N端或者C端多了几个AA这都是不可避免的,你表 ...
因为需要做的克隆比较多,所以就打算直接在载体的酶切位点前面加上ATG,谢谢啊
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6楼
2014-07-24 12:45:32
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红卫大兵
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coffee159: 金币+1
2014-07-23 21:35:22
你确定没有起始密码子?那它怎么表达的?
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2楼
2014-07-23 21:33:29
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2楼
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Originally posted by
红卫大兵
at 2014-07-23 21:33:29
你确定没有起始密码子?那它怎么表达的?
我要表达的是融合蛋白,前边是一段短肽,是没有起始密码子的
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3楼
2014-07-23 21:35:15
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luwei13566
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coffee159(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流
2014-07-24 09:53:12
起始密码子是肯定要加的,载体上没有你就得手动加上,你在你酶切位点前面加一个ATG引入了3个AA,而你在酶切位点后面加ATG就引进一个M,你说哪个更合适?
一般用载体导致N端或者C端多了几个AA这都是不可避免的,你表达出来的叫重组蛋白又不是原始的蛋白,一般不影响的。
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大家相互帮助哈
4楼
2014-07-23 22:03:07
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