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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题, 已有5人参与

如图,我在夏天跑的蛋白电泳和冬天清晰度完全不一样,夏天的好模糊,一团团的,没有清晰边界。而冬天跑的非常清晰;

请各位分析下原因:
中间变化的因素:1)冬天用的是自制的试剂、缓冲液等,夏天用的是碧云天公司买的成套蛋白电泳试剂;
                2)冬天实验室温度在10-15度左右,夏天实验室温度25-35间;其他 诱导条件均不变
                3)个人操作冬天是新手,夏天熟练多了

各位帮忙找找原因,跪谢!!!!

谁能找到正确的答案及分析,另加金币

重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题,
未标题-1.jpg
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-07-23 22:42:26
新手都以为上样体积一样上样量就一样,除了体积跟样品中蛋白的浓度也有关系的。
...

这个我也不好掌握,因为每次都是取得1毫升菌液提取的总蛋白,然后用上样缓冲液稀释的。如果浓度稀了增加上样体积能否解决这个问题?
边界模糊一团不是降解的问题吗?
如果是降解该如何处理?
8楼2014-07-23 23:00:15
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:47:40
模糊的原因一是样品上样量太少,你看marker其实跑的结果差不多;二可能是温度导致的,可以采用恒温电泳系统解决。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-07-23 11:50:48
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:47:58
我觉得是温度太高蛋白有部分降解了,加大上样量,然后电泳过程中加冰块或者在制冷的柜子里进行,总之要保持低温,至少也要4度啊,现在夏天这么热样品也要尽量放在冰盒上,不能像冬天那么拿来拿去!祝你顺利,有问题再联系!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-23 12:02:14
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charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-07-23 11:50:48
模糊的原因一是样品上样量太少,你看marker其实跑的结果差不多;二可能是温度导致的,可以采用恒温电泳系统解决。

上样量都是12UL左右,没有变化
无乱冬天夏天,每次电泳都是放在盛满冰水的盆子里跑的,电泳内的温度应该差别不大
4楼2014-07-23 14:51:01
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