24小时热门版块排行榜    

查看: 1730  |  回复: 19
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题, 已有5人参与

如图,我在夏天跑的蛋白电泳和冬天清晰度完全不一样,夏天的好模糊,一团团的,没有清晰边界。而冬天跑的非常清晰;

请各位分析下原因:
中间变化的因素:1)冬天用的是自制的试剂、缓冲液等,夏天用的是碧云天公司买的成套蛋白电泳试剂;
                2)冬天实验室温度在10-15度左右,夏天实验室温度25-35间;其他 诱导条件均不变
                3)个人操作冬天是新手,夏天熟练多了

各位帮忙找找原因,跪谢!!!!

谁能找到正确的答案及分析,另加金币

重金求证论文中碰到的蛋白电泳模糊不清晰的问题,
未标题-1.jpg
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-07-23 22:42:26
新手都以为上样体积一样上样量就一样,除了体积跟样品中蛋白的浓度也有关系的。
...

这个我也不好掌握,因为每次都是取得1毫升菌液提取的总蛋白,然后用上样缓冲液稀释的。如果浓度稀了增加上样体积能否解决这个问题?
边界模糊一团不是降解的问题吗?
如果是降解该如何处理?
8楼2014-07-23 23:00:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 20 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:47:40
模糊的原因一是样品上样量太少,你看marker其实跑的结果差不多;二可能是温度导致的,可以采用恒温电泳系统解决。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2014-07-23 11:50:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-07-23 12:47:58
我觉得是温度太高蛋白有部分降解了,加大上样量,然后电泳过程中加冰块或者在制冷的柜子里进行,总之要保持低温,至少也要4度啊,现在夏天这么热样品也要尽量放在冰盒上,不能像冬天那么拿来拿去!祝你顺利,有问题再联系!

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-07-23 12:02:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charles08

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2014-07-23 11:50:48
模糊的原因一是样品上样量太少,你看marker其实跑的结果差不多;二可能是温度导致的,可以采用恒温电泳系统解决。

上样量都是12UL左右,没有变化
无乱冬天夏天,每次电泳都是放在盛满冰水的盆子里跑的,电泳内的温度应该差别不大
4楼2014-07-23 14:51:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 275求调剂 +5 明远求学 2026-03-01 5/250 2026-03-02 18:19 by lature00
[考研] 284求调剂 +3 天下熯 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:15 by lature00
[考研] 289求调剂 +6 yang婷 2026-03-02 6/300 2026-03-02 18:05 by 无际的草原
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +12 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 12/600 2026-03-02 16:18 by youmomaoyan
[考研] 求调剂 +9 yunziaaaaa 2026-03-01 10/500 2026-03-02 15:18 by 半截的诗0927
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +3 llx0610 2026-03-02 3/150 2026-03-02 14:15 by yc258
[考研] 0856调剂 +7 刘梦微 2026-02-28 7/350 2026-03-02 14:11 by liyongv
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[基金申请] 成果系统访问量大,请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便,敬请谅解。 +5 xhuama 2026-03-02 5/250 2026-03-02 12:34 by stidwellNK
[考研] 材料学硕318求调剂 +14 February_Feb 2026-03-01 16/800 2026-03-02 11:17 by yuchj
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见