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flhua

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bachelordom

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【答案】应助回帖

★ ★
baidiliulian(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-07-31 09:05:00

引用回帖:

2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-21 11:36:09
全是野生菌还是重组效率不高与筛选效率低的问题
1.现在有种单交换的无缝敲除，重组几率肯定比双交换高。
2.既然你是无缝克隆，那你后期是怎么筛选的？缺陷型吗？

1，重组概率不是很低，能筛选到单臂交换菌株，就是说可以发生重组；但是每次从哪个臂交换上，从哪个臂又交换下来；
2，单纯敲除掉某个基因，考察该基因功能，不是营养缺陷性突变株构建。

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只要有梦想，坚持就一定能实现

11楼2014-07-30 17:40:34

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金书豆豆

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用什么载体敲除？

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12楼2014-07-30 23:58:13

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zhaodahe

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【答案】应助回帖

引用回帖:

9楼: Originally posted by flhua at 2014-07-30 17:34:44
我已经鉴定是单臂交换了，希望通过另外一个臂交换得到突变株，即双交换（目的突变株）。可是好像单臂交换后，再次进行筛选又从相同臂交换，变回野生型，很是郁闷，筛了2000个克隆，50个第二次交换株，但都是野生型 ...

不知道你用的什么筛选标记？觉得你的双交换效率偏低，2000个才有50个；在没有压力的条件下，于液体培养基中转接培养两次，可能会提高双交换的比例。

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13楼2014-07-31 09:19:33

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