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baidiliulian

木虫 (小有名气)

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[求助] 基因敲除双交换问题已有4人参与

我是通过接合转移无痕敲除基因，双交换的是总是筛出来的是野生型，大家有没有好的方法筛到突变株。

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1楼2014-07-21 10:40:29

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zhaodahe

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

引用回帖:

9楼: Originally posted by flhua at 2014-07-30 17:34:44
我已经鉴定是单臂交换了，希望通过另外一个臂交换得到突变株，即双交换（目的突变株）。可是好像单臂交换后，再次进行筛选又从相同臂交换，变回野生型，很是郁闷，筛了2000个克隆，50个第二次交换株，但都是野生型 ...

不知道你用的什么筛选标记？觉得你的双交换效率偏低，2000个才有50个；在没有压力的条件下，于液体培养基中转接培养两次，可能会提高双交换的比例。