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lflishan

木虫 (正式写手)

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[交流] 通过SDS凝胶电泳分离提纯蛋白

由于在跑电泳时发现一些新的有意思的蛋白，想看看是什么蛋白。因此，老板希望能跑完电泳，再把想要的蛋白提取出来，去测序。请问跑完电泳用考马斯亮蓝染色后怎么提取出来呢？还是要用别的试剂染色？从凝胶中提取蛋白的具体方法步骤是什么呢？平时实验室做电泳相关实验很少，缺乏经验。希望有经验的高手们能够提供一些帮助，谢谢大家了！

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1楼 2014-07-14 08:52:19

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xuyunjian

铁虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lflishan: 金币+5 2014-07-17 15:20:11

1. 首先，你要确定SDS对你的蛋白活性是否有影响，如无影响可以将蛋白从SDS-PAGE中提取出来做活性检测。
2. 将你的蛋白样品进行SDS-PAGE分离，考马斯亮兰染色确定目的条带的位置，将目的条带分别从胶上切下，并切成1mm左右的小粒，分别装入3个大小合适的透析袋内，透析袋内加入0.5-1ml的SDS-PAGE running buffer封好，将透析袋放入水平电泳槽（DNA电泳槽即可）中，槽内加入SDS-PAGE running buffer刚好没过透析袋，120-150V跑1小时，此时小胶粒应无色透明，袋内buffer应变兰，说明蛋白已从胶粒进入buffer中，回收此buffer冻干即可进行活性检测。
3. 如SDS-PAGE running buffer对活性检测有影响，也可对上步回收到透析袋内的buffer透析更换适当的缓冲液。
也可以用电洗脱：
将目标蛋白带切下，剪开或捣碎，置于分子量大小合适的透析袋内，加少量缓冲液，把透析袋放入带有缓冲液的水平电泳槽中，直到蛋白质离开凝胶（由蛋白质的分子量决定），而后再电源电极倒转几秒钟即可。
给您一个链接：http://www.ebiotrade.com/newsf/2003-10/B20031031163317.htm