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人生初见木虫 (小有名气)
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[求助]
求助qPCR相关问题！新手，真的好纠结啊 已有3人参与
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投了文章，让补定量的实验，时间比较紧。但自己是新手，做了之后结果不好，不知道问题出在哪里，还请高手指点啊！！！ 做标曲时，目的基因的E=108%, 内参E=98%。 而且目的基因的，除了一个最低浓度的一个孔溶解曲线前面有个小峰外，其余都正常。见图一。 但是做我的样品时候，所有的孔，包括内参引物的在溶解曲线前面都出现了小峰，有的峰值还很高。见图二。 我想问：1、内参和目的基因的扩增效率差10%，是不是不能用2−ΔΔCt进行计算呢？优化体系条件能使二者的扩增效率接近吗？ 2、溶解曲线前面出现小峰，是不是因为模板有问题呢？是不是基因组DNA的污染？ 真的很着急，不知道该如何解决。 请大家帮帮忙，不甚感激！！  截图1.png  截图2.png |
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