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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物信息 » 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？
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张冰宝

新虫 (小有名气)

[求助] 目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？ 已有6人参与

我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下 谢谢
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1楼 2014-07-07 16:14:58
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张冰宝

新虫 (小有名气)
引用回帖:
52楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-07-22 19:09:09
看来就是你割胶回收的问题了。优化下酶连体系吧
1.你的表达载体多大？也是割胶回收的吧，估计浓度也不高。以后载体双酶切后可以直接用PCR产物纯化试剂盒纯化，不割胶估计损失会小些，纯化后也测个浓度。你这次又涂 ...

1.我的表达载体是5900bp，我是直接就是酶切产物回收的 ，就是怕损失。
2.这次涂了两个平板，自己转化的那个板没长，另一个是商品化的阳性质粒，长了满板。可以排除板子和感受态的问题
3.是因为我的两个酶切位点在载体上非常接近，所以不好辨认是否切开，但是我用我同门切好的也是连不上，（我同门连上了）。所以应该不是表达载体的问题。
4.我现在的连接体系是：5微升体系：（基因3ul。载体1ul。T4buffer  0.5ul。T4酶0.5ul）
10微升体系：（基因6ul，载体1ul，buffer1ul，酶1ul，水1ul）
不加水全加基因我也试过，但是也是每长菌。所以我想可能是我的回收片段有问题
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55楼2014-07-23 08:54:51
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for5

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
张冰宝(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-07-07 20:38:27
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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操蛋的XX
2楼2014-07-07 16:19:56
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-07-22 20:43:59
我们实验室有专门抽真空的仪器呢

[ 发自小木虫客户端 ]
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天道酬勤
3楼2014-07-07 23:12:13
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_深海渔_

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by for5 at 2014-07-07 16:19:56
简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍

我最近也遇到这方面问题，您能详细的讲一下吗？把纯化回收的DNA溶液放到柱子里然后重新离心吗？谢谢！

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-07-08 00:00:30
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