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目的片段回收后浓度较低，如何浓缩？ 已有6人参与
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| 我回收了我的目的片段，条带很暗且稍偏高，浓度有些低，连接表达载体一直连接不上，希望可以把我的目的片段浓缩一下。不知道该如何浓缩，希望知道的大侠们指点一下 谢谢 |
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luwei13566
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-21 11:02:36
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-07-21 11:02:36
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你连上T载体测序除了一个点突变其他的位置正确对吧，你现在的问题是1.你切胶回收后比较暗，2.条带偏大，3.以胶回收产物二次PCR无条带。 针对第一点，首先你要考虑你酶切完全不完全~或者你的酶切位点甲基化导致切割困难，酶切时间短自然你基因条带弱 针对第二点，T载体上也是有不少酶切位点的，如果你的酶切时间不够或酶切位点甲基化，切割出现在载体的酶切位点上自然你要回收的序列会偏大。 针对第三点，你割胶回收后测过浓度吗？你的条带本身就很弱我估计你回收完都没东西了。 所以最好的解决办法就是延长切割时间，其次筛查你加的酶切位点是否有甲基化酶识别区导致甲基化。你有你酶切质粒的电泳图吗？能不能发出来看看你的图 |
28楼2014-07-21 10:57:50
for5
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2楼2014-07-07 16:19:56
随风飘摇11
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3楼2014-07-07 23:12:13
4楼2014-07-08 00:00:30
