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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 今天做了个双荧光，出现了比较诡异的结果。。。
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utyutyy

新虫 (小有名气)

[求助] 今天做了个双荧光，出现了比较诡异的结果。。。 已有1人参与

做的miRNA干扰试验，与靶基因的3’UTR共转的BHK细胞，今天做了一下双荧光检测，用的是PMIR-GLO载体。

结果问题来了，加过STOP以后，荧光值陡然升高，按照师兄师姐的说法，貌似应该降低才对。。。。

1，有没有战友也遇到类似的情况？
2，对于双荧光素酶报告结果，应该如何处理分析？（自己做，无人指导。。。）

先谢谢各位战友了！！！
PS:附上我的数据结果
今天做了个双荧光，出现了比较诡异的结果。。。
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    • 2014-07-04 14:28:41, 18.5 K

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1楼 2014-07-04 14:28:45
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佳逸轩居士

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
utyutyy(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-12 20:21:50
引用回帖:
3楼: Originally posted by utyutyy at 2014-07-06 18:20:49
PS：我们组用的载体是包含了firefly和renilla两种荧光蛋白基因的，所以不存在能够降低renilla的情况。我纳闷的就是为何同样的做法，结果我的荧光值要高很多

你的这个报告基因质粒里面整合了两个荧光素酶，萤火虫和海肾，其中海肾作为内参是吗？看你的结果和我的非常像，我用的是psiCHECK-2 也是两种质粒整合在一个质粒中的。我的海肾荧光素酶（内参）的读数也是明显高于firefly的，两者的比值在0.1左右。
还有，我转染psiCHECK-2和pcDNA的荧光比值要高于转染psiCHECK-2/靶基因和miRNA-expression的实验组。

楼主找到解决的方法了吗？
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4楼2014-12-08 22:25:49
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utyutyy

新虫 (小有名气)
顶一下。。。。。。。。。。。。。。
2楼2014-07-06 18:17:11
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utyutyy

新虫 (小有名气)
PS：我们组用的载体是包含了firefly和renilla两种荧光蛋白基因的，所以不存在能够降低renilla的情况。我纳闷的就是为何同样的做法，结果我的荧光值要高很多
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3楼2014-07-06 18:20:49
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bzyooo

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 佳逸轩居士 at 2014-12-08 22:25:49
你的这个报告基因质粒里面整合了两个荧光素酶，萤火虫和海肾，其中海肾作为内参是吗？看你的结果和我的非常像，我用的是psiCHECK-2 也是两种质粒整合在一个质粒中的。我的海肾荧光素酶（内参）的读数也是明显高于f ...

您好，你转染的miRNA是哪个公司的
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5楼2014-12-12 16:52:33
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