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luckydog52木虫 (著名写手)
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[求助]
染色质免疫共沉淀 中的 INPUT 和IP代表什么？ 已有5人参与
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看文献遇到染色质免疫共沉淀的图，其中的INPUT 和IP是什么意思啊？ 希望谁能简单的解释一下，谢谢 |
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jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
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gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 15:28:11
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-07-16 15:28:11
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ChIP---染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation assay）是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法。 IP--免疫沉淀（immunoprecipitation），在CHIP试验中主要有两点意思：1）抗原蛋白质（靶蛋白，即所研究的目的基因编码的蛋白质，一般是带有标签如GFP，MYC的融合蛋白）和抗体的特异性结合；2）细菌蛋白质的“prorein A”特异性地结合到免疫球蛋白，即抗体的FC片段。现在多用精制的prorein A预先结合固化在argarose的beads。 结合ChiP的具体操作步骤，甲醛处理细胞→收集细胞，超声破碎，即得到核蛋白和DNA。从这里开始分两部分，A部分不错任何处理，作为Input；B部分加相应的抗体（根据你转基因的标签或者自己合成的靶蛋白的抗体），作为IP。加抗体，与靶蛋白-DNA复合物相互结合→加入ProteinA，结合抗体-靶蛋白-DNA复合物，并沉淀→解交联，ProteinK消化蛋白，并提取DNA。同时也将Input的DNA提取出来。 IP下的DNA想对于INput的DNA肯定是很少的，IP/Input的比值就反应出目的蛋白结合ＤＮＡ的量，这两个的ＤＮＡ含量是通过Ｒｅａｌ Ｔｉｍｅ ＰＣＲ中的ＣＴ值来呈现。 |
4楼2014-07-09 15:48:44
5楼2018-11-14 13:54:07
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