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沙伯略捐助贵宾 (正式写手)
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Transwell做荧光黄等标记物测量Papp值时，能用PBS代替HBSS吗？ 已有2人参与
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各位虫友：我的实验是将Caco-2细胞接种到Transwell上，培养21天，期间测量跨膜电阻抗值（TEER），建立肠上皮紧密连接模型。到达18-23天左右，TEER值约为600-800Ω（而在第13天TEER达到最大值1800Ω，之后，逐渐下降，到21天，TEER下降到600-1000Ω，此时做了荧光黄通透性实验），现欲验证紧密连接的完整性，故利用荧光黄来检测表观通透性（Papp）。Transwell上室加0.5ml的200ug/ml荧光黄（PBS为溶剂），下室加1.5mlPBS，培养箱中孵育1h后，在下室取样1ml，利用荧光分光光度计推算透过Transwell的荧光黄浓度（线性提前已做好，在线性范围内。Papp值刚好在n*10^-6cm/s（n=2,3,4,5,6,7），即papp刚好处在10^-6cm/s数量级上，并未达到文献所述的小于10^-6cm/s的要求。 请问，问题出在哪里呢？ 是紧密连接模型未达到要求（如前所述，电阻值在13天达最大值后又逐渐下降）还是因为透过性试验不能用PBS，只能用HBSS?(因为我看到文献里面一般用HBSS做荧光黄通透性实验)。 敬请各位同道不吝赐教啊~~~  |
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9楼2014-08-18 19:55:39
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