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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » Transwell做荧光黄等标记物测量Papp值时，能用PBS代替HBSS吗？
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)

[求助] Transwell做荧光黄等标记物测量Papp值时，能用PBS代替HBSS吗？ 已有2人参与

各位虫友：我的实验是将Caco-2细胞接种到Transwell上，培养21天，期间测量跨膜电阻抗值（TEER），建立肠上皮紧密连接模型。到达18-23天左右，TEER值约为600-800Ω（而在第13天TEER达到最大值1800Ω，之后，逐渐下降，到21天，TEER下降到600-1000Ω，此时做了荧光黄通透性实验），现欲验证紧密连接的完整性，故利用荧光黄来检测表观通透性（Papp）。Transwell上室加0.5ml的200ug/ml荧光黄（PBS为溶剂），下室加1.5mlPBS，培养箱中孵育1h后，在下室取样1ml，利用荧光分光光度计推算透过Transwell的荧光黄浓度（线性提前已做好，在线性范围内。Papp值刚好在n*10^-6cm/s（n=2,3,4,5,6,7），即papp刚好处在10^-6cm/s数量级上，并未达到文献所述的小于10^-6cm/s的要求。
             请问，问题出在哪里呢？
       是紧密连接模型未达到要求（如前所述，电阻值在13天达最大值后又逐渐下降）还是因为透过性试验不能用PBS，只能用HBSS?(因为我看到文献里面一般用HBSS做荧光黄通透性实验)。
           敬请各位同道不吝赐教啊~~~
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向前出发，永远向前！
1楼 2014-07-02 23:40:40
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独来独往000

铁虫 (小有名气)
有些细胞荧光负载液最好用HBSS~
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3楼2014-07-07 16:31:59
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icyyang小狸

铁虫 (初入文坛)
不应该用1640吧，不是应该用DMEM吗？我也在做Caco-2的实验。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

沙伯略
7楼2014-08-09 17:11:14
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普通回帖

沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)
大虫们都在忙什么呢？？？给个意见啊~~~
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向前出发，永远向前！
2楼2014-07-05 19:21:30
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 独来独往000 at 2014-07-07 16:31:59
有些细胞荧光负载液最好用HBSS~

为什么呢？都是缓冲液啊~为保险起见，我配制荧光黄就用完全培养基行吗？
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向前出发，永远向前！
4楼2014-07-07 22:14:13
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独来独往000

铁虫 (小有名气)
★ ★
youlinglyw: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，生物科学有你更精彩！ 2014-07-08 10:42:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by 沙伯略 at 2014-07-07 22:14:13
为什么呢？都是缓冲液啊~为保险起见，我配制荧光黄就用完全培养基行吗？...

可以的~~因为HBSS有钙和镁 还有葡萄糖  这些对于维持在孵育期间细胞活性也是必要的   1640你试试~
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5楼2014-07-08 10:19:35
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沙伯略

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 独来独往000 at 2014-07-08 10:19:35
可以的~~因为HBSS有钙和镁 还有葡萄糖  这些对于维持在孵育期间细胞活性也是必要的   1640你试试~...

好，谢谢，我试试怎么样~
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向前出发，永远向前！
6楼2014-07-08 12:30:54
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沙伯略

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引用回帖:
7楼: Originally posted by icyyang小狸 at 2014-08-09 17:11:14
不应该用1640吧，不是应该用DMEM吗？我也在做Caco-2的实验。

我用的也是DMEM!
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向前出发，永远向前！
8楼2014-08-16 18:13:05
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李小慢cat

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好！我最近也在做caco-2细胞，也想测荧光黄通透性，请问楼主荧光黄是买的sigma的吗，应该买什么样的呢？买回来之后的梯度浓度就自己配制是吗，能不能请教一下，谢谢~
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9楼2014-08-18 19:55:39
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沙伯略

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引用回帖:
9楼: Originally posted by 李小慢cat at 2014-08-18 19:55:39
你好！我最近也在做caco-2细胞，也想测荧光黄通透性，请问楼主荧光黄是买的sigma的吗，应该买什么样的呢？买回来之后的梯度浓度就自己配制是吗，能不能请教一下，谢谢~

是sigma的，但是给荧光黄后的孔，电阻值直线下降，最后细胞全死。这只能在最初用于检测膜的致密性与完整性。。。。
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10楼2014-08-18 23:15:35
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