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竹影静亭

新虫 (初入文坛)

[求助] 线粒体膜电位检测 已有4人参与

有用JC-1检测线粒体膜电位的吗，我用荧光显微镜观察结果。必须是活细胞观察吗，细胞可以固定吗？求指教！
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1楼 2014-06-30 09:58:33
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竹影静亭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-06-30 10:12:08
转载：
细胞固定的方法

选择最佳固定液标准是：
（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；
（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的；
（3）不要用可能带 ...

我想问的是JC-1染完的细胞可以固定后在观察吗？
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3楼2014-06-30 10:52:37
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
竹影静亭(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-06-30 20:57:20
转载：
细胞固定的方法

选择最佳固定液标准是：
（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；
（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的；
（3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光；
（4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。
单纯固定液
（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。
甲醛（40%） 100ml
无水磷酸氢二钠 6.5g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水 900ml
（2）乙醇固定液：使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。
（3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。
混合固定液
（1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。
甲醛（40%） 100ml
95%乙醇 900ml
（2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。
无水醋酸钠 1.25g
升汞 6.0g
蒸馏水 90ml
使用前加入甲醛 10ml
（3）Bouin固定液：非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。
饱和苦味酸水溶液（约1.22%） 75ml
甲醛 25ml
冰醋酸 5ml
（4）Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。
无水乙醇 60ml
氯仿 30ml
冰醋酸 10ml
（5） Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。
升汞 　　　　　　　　 5.0g
重铬酸钾 　　　　　　　2.5g
硫酸钠 　　　　　　　1.0g
蒸馏水（加至）　　　　100ml
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-06-30 10:12:08
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Amyjoah

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我用的也是JC-1荧光显微镜观察，收集细胞后用JC-1工作液染色后，洗2遍，在荧光显微镜下观察，荧光淬灭很快，观察要迅速，收集过程中要保证细胞完整性，另外，问一下楼主用的试剂盒是碧云天的吗？碧云天的用着不错，就是有点贵
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4楼2014-11-28 19:57:48
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zhiqiangdo

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Amyjoah at 2014-11-28 19:57:48
我用的也是JC-1荧光显微镜观察，收集细胞后用JC-1工作液染色后，洗2遍，在荧光显微镜下观察，荧光淬灭很快，观察要迅速，收集过程中要保证细胞完整性，另外，问一下楼主用的试剂盒是碧云天的吗？碧云天的用着不错， ...

你好,请问JC-1荧光显微镜观察线粒体膜电位好做吗?谢谢,我最近也打算做这个,有什么要注意的,请指教一下了!
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5楼2015-01-24 16:59:28
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