应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做RACE老是出现非特异扩增，求助！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2023  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)

[求助] 做RACE老是出现非特异扩增，求助！ 已有3人参与

我在做RACE扩增一个基因的全长cDNA，设计的基因特异引物可以扩增出中间的重叠片段（经测序确证），但是5‘和3’RACE总是做不出来。根据已经扩增出的中间片段，设计了5‘和3’RACE引物，能扩增出条带，Maker指示的片段大小也和目的片段大小差不多，但是经切胶回收，连接转化，挑斑，送菌样测序后测回来的序列在NCBI上比对后，发现相似性较高的老是一些别的东西的序列（如某个病毒的基因组，或者是某个东西的核糖体蛋白）。也尝试换过引物，但是要么扩不出东西，要么是空载体，要么是上述那种情况。我用的是试剂盒是SMART™ RACE cDNA Amplification Kit。请有经验的高人指点，不胜感激！

[ Last edited by 西门吹雪170 on 2014-6-28 at 12:44 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
爱出者爱返，福往者福来
1楼 2014-06-28 11:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
青青草allan: 金币+1, ★有帮助 2014-07-11 21:37:04
青青草allan: 金币+1, ★有帮助 2014-07-11 21:37:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-06-30 09:09:15
我们实验室是统一提的RNA，做的cDNA，也有别的人在用，也有做出来别的基因的全长的，应该没有问题。避免反复冻融，我们做的5‘和3’cDNA是用小PCR分装的，一直放在-20度，现在已经放了有两个多月。我是在做5个基因 ...

你们的双链cDNA做的好不好？race获得的序列能否与已知片段拼接起来？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-30 09:17:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-06-28 19:50:49
你的双链做的怎么样？RNA质量好不好？特异引物设计的退火多少度？测序后能不能拼接？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-06-28 12:07:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-28 12:07:43
你的双链做的怎么样？RNA质量好不好？特异引物设计的退火多少度？测序后能不能拼接？

我们实验室是统一提的RNA，做的cDNA，也有别的人在用，也有做出来别的基因的全长的，应该没有问题。避免反复冻融，我们做的5‘和3’cDNA是用小PCR分装的，一直放在-20度，现在已经放了有两个多月。我是在做5个基因的全长，特异引物设计的退火温度都不一样啊，都做出来了，有的800-1000bp的基本上测序的时候都让公司给双向测通拼接了，小于800bp的基本都是让正向测序，没有拼接过。有影响吗？谢谢回帖！
赞一下 回复此楼
爱出者爱返，福往者福来
3楼2014-06-30 09:09:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青青草allan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-06-30 09:17:05
你们的双链cDNA做的好不好？race获得的序列能否与已知片段拼接起来？
...

cDNA应该没有问题。迄今为止只得到了一个基因的5‘端序列，和这个基因的已知片段有将近300bp的重叠，可以拼接起来的。
赞一下 回复此楼
爱出者爱返，福往者福来
5楼2014-06-30 11:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +4 荷包蛋hyj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 00:39 by wxiongid
[考研] 342求调剂 +3 加油a李zs 2026-03-26 3/150 2026-03-27 00:29 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 材料调剂 5+4 想要一壶桃花水 2026-03-25 10/500 2026-03-26 19:56 by 不吃魚的貓
[考研] 总分322求生物学/生化与分子/生物信息学相关调剂 +5 星沉uu 2026-03-26 6/300 2026-03-26 19:02 by macy2011
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 274求调剂 +14 顾九笙要谦虚 2026-03-24 20/1000 2026-03-26 18:15 by 乐呵呵的追梦人
[考研] 275求调剂 +9 Micky11223 2026-03-25 11/550 2026-03-26 15:54 by 不吃魚的貓
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 一志愿070300浙大化学358分，求调剂！ +4 酥酥鱼.. 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:12 by Iveryant
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭