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xissy

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[求助] 枯草芽孢杆菌表达人源蛋白的问题

小妹最近在做枯草芽孢杆菌表达人来源的重组蛋白，发现很多蛋白都不表达，或者表达的非常不好。WESTERN可以检测，SDS-PAGE看不到。而芽孢自身来源的重组蛋白表达却不错。但是我的最终目的就是用来表达人源蛋白的。请问做重组蛋白表达的话，枯草芽孢杆菌适合表达什么蛋白呢？

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1楼 2014-06-24 15:22:24

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huangrui1988

铜虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by xissy at 2014-06-26 21:32:48
我是选择的WB800。我现在用的是pHT43自身携带的信号肽，淀粉酶的信号肽。
芽孢属的蛋白做了2个，基本上有1mg/300ml，这个是条件还没有优化的。可以满足我的需要。
我想问的是，需要同一个质粒构建几个不同的信号 ...

你做的两个蛋白是什么，摇瓶的话，3mg每1L，真心比较少。。。没有100mg都不好意思说是芽孢做的。

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8楼2014-06-26 22:10:24

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huangrui1988

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【答案】应助回帖

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xissy(kx444555代发): 金币+3, 鼓励交流 2014-06-25 08:33:43
xissy: 金币+3 2014-06-26 21:29:39
gyesang: 应助指数+1 2014-06-29 17:45:57

是这样的，首先选择菌株很重要，WB800敲除了多个蛋白酶，可能对你更加合适。其次，你要选择合适的信号肽来分泌你的蛋白，wb可以检测，说明已经分泌了，你可以看看有没有活性。SDS page的灵敏度肯定没有WB高啊，这个·很正常，一般都要浓缩的，工业上也要高密度发酵的啊，接着分泌水平基本上有10-50倍的提高，所以不用担心。自身来源的蛋白不错，有多不错？g/l?你自己做的数据是？枯草芽孢杆菌表达大宗酶类，如淀粉酶效果不错，可以有25-30g/l

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2楼2014-06-24 15:56:09

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