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hbl215

金虫 (文坛精英)

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[求助] 关于噬菌体展示技术的一些问题已有4人参与

最近在学习基因重组跟噬菌体展示技术这一块，完全小白一枚，再看文献中有几个问题想请教：
1.从杂交瘤细胞中提取总RNA反转录成CDNA，再设计带有poly-C尾巴的anchor引物作为5’端引物扩增抗体的可变区，这里的5’端引物是不是仅靠这些G-C配对就可以延伸呢，如果是的话至少需要多少碱基配对就可以保证延伸？
2.3’端的基因特异性引物是以FR4为模板设计的么，还是其他的设计方案？或者3’端引物以恒定区序列为模板设计，先扩增出整个重轻链基因，再通过基因序列比对，除去一样的恒定区序列，剩下的就是可变区序列？
3.在噬菌体库的富集筛选中，为什么富集到最后一轮，库容量越来越大呢？我的理解是筛去原始库中的一些不结合的噬菌体后，库应该越来越小呀，最后浓缩出高结合力的精华呀。
希望做过的懂得的帮我解释一下，小白不胜感激！

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1楼2014-06-24 11:07:20

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引用回帖:

7楼: Originally posted by whui at 2014-06-26 14:39:38
关于5‘引物，一般是用leader 或者FR1的保守序列来设计兼并引物使用。不知道你所说的polyC具体是指什么？mRNA帽子结构？
3’端引物，通常做FAB库，会将恒定区CH1/CK的末端来作为引物使用。对于scFv库，可以CH1/CK的 ...

谢谢！给我比较全的答案，