| 查看: 2844 | 回复: 17 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
hbl215金虫 (文坛精英)
|
[求助]
关于噬菌体展示技术的一些问题 已有4人参与
|
|
|
最近在学习基因重组跟噬菌体展示技术这一块，完全小白一枚，再看文献中有几个问题想请教： 1.从杂交瘤细胞中提取总RNA反转录成CDNA，再设计带有poly-C尾巴的anchor引物作为5’端引物扩增抗体的可变区，这里的5’端引物是不是仅靠这些G-C配对就可以延伸呢，如果是的话至少需要多少碱基配对就可以保证延伸？ 2.3’端的基因特异性引物是以FR4为模板设计的么，还是其他的设计方案？或者3’端引物以恒定区序列为模板设计，先扩增出整个重轻链基因，再通过基因序列比对，除去一样的恒定区序列，剩下的就是可变区序列？ 3.在噬菌体库的富集筛选中，为什么富集到最后一轮，库容量越来越大呢？我的理解是筛去原始库中的一些不结合的噬菌体后，库应该越来越小呀，最后浓缩出高结合力的精华呀。 希望做过的懂得的帮我解释一下，小白不胜感激！ |
回复此楼» 猜你喜欢
40+中年人失业后，还能找到好工作吗？
已经有11人回复
-
用NBS溴化时溶剂除了CCl4外还有什么
已经有6人回复
-
申请科研项目纯靠实力能成功吗？
已经有11人回复
-
极限拉扯，如何抉择
已经有15人回复
-
二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores
已经有4人回复
-
OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？
已经有13人回复
-
课题组会帮你通过考核么？
已经有7人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有9人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问，一个抗原可以结合多少抗体？
已经有4人回复
- 如何将蛋白展示在噬菌体M13衣壳蛋白PVIII表面？
已经有4人回复
- 2014年天津市第一批科技计划项目立项公告
已经有19人回复
- 噬菌体p3展示肽库
已经有7人回复
- 鉴定一个基因的特定功能需要从哪些方面开展研究才能确定？
已经有10人回复
- 世界著名的生物技术公司
已经有32人回复
- 噬菌体分类问题
已经有10人回复
- 噬菌体展示库淘选出抗体，怎么检测抗体与抗原的结合能力
已经有7人回复
- 武汉友芝友生物制药有限公司求生物科研人才
已经有32人回复
hbl215
金虫 (文坛精英)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1533.7
- 散金: 593
- 红花: 7
- 帖子: 15735
- 在线: 536.1小时
- 虫号: 3234224
- 注册: 2014-05-26
- 专业: 抗体工程学
4楼2014-06-25 16:16:11
5楼2014-06-26 08:48:02
hbl215
金虫 (文坛精英)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1533.7
- 散金: 593
- 红花: 7
- 帖子: 15735
- 在线: 536.1小时
- 虫号: 3234224
- 注册: 2014-05-26
- 专业: 抗体工程学
6楼2014-06-26 09:29:58
whui
至尊木虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 14898.7
- 红花: 1
- 帖子: 1077
- 在线: 619.1小时
- 虫号: 133954
- 注册: 2005-12-14
- 专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hbl215: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-06-27 09:31:34
感谢参与，应助指数 +1
hbl215: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-06-27 09:31:34
|
关于5‘引物，一般是用leader 或者FR1的保守序列来设计兼并引物使用。不知道你所说的polyC具体是指什么？mRNA帽子结构？ 3’端引物，通常做FAB库，会将恒定区CH1/CK的末端来作为引物使用。对于scFv库，可以CH1/CK的恒定区起始端做一扩引物，再用FR4作为二扩引物，当然也可以用FR4序列直接做引物来扩增。 和CDR的定义不同，恒定区序列已经有了严格的定义，你可以找文献或IMGT看看。 富集筛选，顾名思义当然是越来越富集了：） 前面已经有人提过了，你可以理解为：筛选剩下的克隆被特异性富集，此时的库容只代表富集的程度，而非抗体多样性了。 看你介绍，应该是做鼠抗，现在应经有很多现成的引物集可以用，你可以查查文献。这里推荐一篇经典的 Efficient amplification and direct sequencing of mouse variable regions from any immunoglobulin gene family 另外，你是本科还是硕士，这种应用性很强的课题最好有师兄师姐带着做，会快捷很多。 |
7楼2014-06-26 14:39:38
10