应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 关于噬菌体展示技术的一些问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2540  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hbl215

金虫 (文坛精英)

[求助] 关于噬菌体展示技术的一些问题 已有4人参与

最近在学习基因重组跟噬菌体展示技术这一块，完全小白一枚，再看文献中有几个问题想请教：
1.从杂交瘤细胞中提取总RNA反转录成CDNA，再设计带有poly-C尾巴的anchor引物作为5’端引物扩增抗体的可变区，这里的5’端引物是不是仅靠这些G-C配对就可以延伸呢，如果是的话至少需要多少碱基配对就可以保证延伸？
2.3’端的基因特异性引物是以FR4为模板设计的么，还是其他的设计方案？或者3’端引物以恒定区序列为模板设计，先扩增出整个重轻链基因，再通过基因序列比对，除去一样的恒定区序列，剩下的就是可变区序列？
3.在噬菌体库的富集筛选中，为什么富集到最后一轮，库容量越来越大呢？我的理解是筛去原始库中的一些不结合的噬菌体后，库应该越来越小呀，最后浓缩出高结合力的精华呀。
希望做过的懂得的帮我解释一下，小白不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-06-24 11:07:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hbl215

金虫 (文坛精英)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wersdu at 2014-06-26 08:48:02
第三个问题，一般在第一轮、第二轮富集过程中，库容不会有明显的增加，第三轮富集库容一般会增加2-3个数量级，是与抗原结合的噬菌体大量拷贝，测序后会发现大量重复克隆。

哦，明白了，那在每一轮的筛选，是把整个库全部筛，还是扩增后取部分出来筛，其余的保存？同样，最后一轮后测序也是扩增后选取部分测序么？
赞一下 回复此楼
6楼2014-06-26 09:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

hbl215

金虫 (文坛精英)
高手在哪里呀，等待解答
赞一下 回复此楼
4楼2014-06-25 16:16:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wersdu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hbl215: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-06-26 09:30:29
第三个问题，一般在第一轮、第二轮富集过程中，库容不会有明显的增加，第三轮富集库容一般会增加2-3个数量级，是与抗原结合的噬菌体大量拷贝，测序后会发现大量重复克隆。
赞一下 回复此楼
5楼2014-06-26 08:48:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whui

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hbl215: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-06-27 09:31:34
关于5‘引物，一般是用leader 或者FR1的保守序列来设计兼并引物使用。不知道你所说的polyC具体是指什么？mRNA帽子结构？
3’端引物，通常做FAB库，会将恒定区CH1/CK的末端来作为引物使用。对于scFv库，可以CH1/CK的恒定区起始端做一扩引物，再用FR4作为二扩引物，当然也可以用FR4序列直接做引物来扩增。
和CDR的定义不同，恒定区序列已经有了严格的定义，你可以找文献或IMGT看看。
富集筛选，顾名思义当然是越来越富集了：） 前面已经有人提过了，你可以理解为：筛选剩下的克隆被特异性富集，此时的库容只代表富集的程度，而非抗体多样性了。
看你介绍，应该是做鼠抗，现在应经有很多现成的引物集可以用，你可以查查文献。这里推荐一篇经典的
Efficient amplification and direct sequencing of mouse variable regions from any immunoglobulin gene family

另外，你是本科还是硕士，这种应用性很强的课题最好有师兄师姐带着做，会快捷很多。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2014-06-26 14:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 309求调剂 +8 谁不是少年 2026-03-29 8/400 2026-03-30 00:55 by 我是小康
[考研] 290求调剂 +3 dfffsar 2026-03-29 3/150 2026-03-29 22:38 by 毛毛毛阿莫2
[考研] 281求调剂 +4 亚克西good 2026-03-26 6/300 2026-03-29 21:06 by 啊李999
[考研] 材料与化工328分调剂 +7 。，。，。，。i 2026-03-23 7/350 2026-03-29 20:58 by 唐沐儿
[考研] 307求调剂 +9 超级伊昂大王 2026-03-24 10/500 2026-03-29 20:26 by 永字号
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 320分，材料与化工专业，求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 286求调剂 +12 PolarBear11 2026-03-26 12/600 2026-03-28 12:14 by zllcz
[材料工程] 一志愿C9材料与化工专业总分300求调剂 +8 曼111 2026-03-24 9/450 2026-03-28 07:58 by YYYYX1234
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[有机交流] 高温高压反应求助 10+4 chibby 2026-03-25 4/200 2026-03-27 21:08 by BT20230424
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 考研调剂 +10 呼呼？~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭