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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 环介导的恒温扩增
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zhk10482

新虫 (初入文坛)

[求助] 环介导的恒温扩增 已有1人参与

求高手！！！
为什么环介导的恒温PCR中模板不要高温变性，可以直接扩增，引物和模板是怎么杂交上的~~~
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1楼 2014-06-17 17:34:39
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yetingyu---

铁虫 (初入文坛)
酶不耐热，必须在模板变性之后加
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5楼2015-10-12 17:09:13
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhk10482: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-18 09:59:56
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:41:49
楼主用心了，在开始反应之前，有一个95度的过程，在这个过程中，引物就配对了，这个过程算是启动吧。后面的恒温过程，产物和引物就可以出于一个配对的动态平衡啊。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2014-06-17 21:37:37
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zhk10482

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-17 21:37:37
楼主用心了，在开始反应之前，有一个95度的过程，在这个过程中，引物就配对了，这个过程算是启动吧。后面的恒温过程，产物和引物就可以出于一个配对的动态平衡啊。

那像这样的话，聚合酶不都要在变性以后再加入了是吗？有没有耐高温的恒温扩增酶呢，至少在95℃5min条件下活性保持50%以上的
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3楼2014-06-18 10:01:21
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
ＬＡＭＰ技术的ＮＡＲ（Ｎｏｔｏｍｉ等２０００年）文章是９５度５分钟后，放在冰上，再加入Ｂｓｔ然后才启动反应。Ｂｓｔ酶的作用是链置换反应（ｓｔｒａｎｄ　ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ），不过可惜的是它不是Ｔａｑ酶，９５度５分钟估计就活性难保了。不能用Ｔａｑ酶是因为Ｔａｑ不具有强的链置换酶的活性，而且６０度的时候，其活性不是很给力。
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2014-06-18 21:03:12
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