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zhk10482

新虫 (初入文坛)

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[求助] 环介导的恒温扩增已有1人参与

求高手！！！
为什么环介导的恒温PCR中模板不要高温变性，可以直接扩增，引物和模板是怎么杂交上的~~~

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1楼 2014-06-17 17:34:39

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pennchem

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ＬＡＭＰ技术的ＮＡＲ（Ｎｏｔｏｍｉ等２０００年）文章是９５度５分钟后，放在冰上，再加入Ｂｓｔ然后才启动反应。Ｂｓｔ酶的作用是链置换反应（ｓｔｒａｎｄ　ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ），不过可惜的是它不是Ｔａｑ酶，９５度５分钟估计就活性难保了。不能用Ｔａｑ酶是因为Ｔａｑ不具有强的链置换酶的活性，而且６０度的时候，其活性不是很给力。