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zhk10482

新虫 (初入文坛)

[求助] 环介导的恒温扩增 已有1人参与

求高手!!!
为什么环介导的恒温PCR中模板不要高温变性,可以直接扩增,引物和模板是怎么杂交上的~~~
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

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zhk10482: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2014-06-18 09:59:56
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-18 10:41:49
楼主用心了,在开始反应之前,有一个95度的过程,在这个过程中,引物就配对了,这个过程算是启动吧。后面的恒温过程,产物和引物就可以出于一个配对的动态平衡啊。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2014-06-17 21:37:37
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zhk10482

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2014-06-17 21:37:37
楼主用心了,在开始反应之前,有一个95度的过程,在这个过程中,引物就配对了,这个过程算是启动吧。后面的恒温过程,产物和引物就可以出于一个配对的动态平衡啊。

那像这样的话,聚合酶不都要在变性以后再加入了是吗?有没有耐高温的恒温扩增酶呢,至少在95℃5min条件下活性保持50%以上的
3楼2014-06-18 10:01:21
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

LAMP技术的NAR(Notomi等2000年)文章是95度5分钟后,放在冰上,再加入Bst然后才启动反应。Bst酶的作用是链置换反应(strand displacement amplification),不过可惜的是它不是Taq酶,95度5分钟估计就活性难保了。不能用Taq酶是因为Taq不具有强的链置换酶的活性,而且60度的时候,其活性不是很给力。
行至水穷处,坐看云起时
4楼2014-06-18 21:03:12
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yetingyu---

铁虫 (初入文坛)

酶不耐热,必须在模板变性之后加
5楼2015-10-12 17:09:13
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