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请教一下用WST-1做细胞毒性测试一些问题
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刚开始做细胞，向各位大神请教一些问题。 选择用WST-1试剂盒测细胞毒性，现在实验有的WST-1，规格是500T，为溶液。 第一个问题：500T是什么单位？ 细胞为MCF-7，96孔板铺板，打算 5000cells/孔，每孔0.2mL培养基，给药后打算24、48、72h后加入WST-1，第二个问题：那么需要WST-1多少毫升？ 文献中有讲初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，第三个问题，那么检测中不会引入细菌吗，有没有影响？ 同时附上看到“WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒”的说明书，但和实验室现有WST-1试剂盒不太一样。多谢！ WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒 使用说明：使用说明： 1. WST-1溶液的配制：把1毫升电子耦合试剂加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一 周，而不影响使用效果。短期内不使用的WST-1溶液，分装后可以-20℃避光保存半年(尽量避免反复冻融)。冻存的WST-1 溶液溶解后可能会观察到一些沉淀物，这是正常现象，37℃水浴孵育2-10分钟，通常可以完全溶解。 2. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数 目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。 3. 每孔加入10微升WST-1溶液。如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升WST-1溶液，其它情况以此类推。可以用 加了相应量细胞培养液和WST-1溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。 4. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况，孵育1-2小时就可以了。时间长短根据细胞的类型和细胞的密度等 实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用 于后续实验。图3为HT-1080细胞在不同时间测定的细胞数量曲线。 |
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2014-06-16 17:02:03, 194.03 K
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