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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 蛋白诱导完后用上样缓冲液处理时样品发黏，是怎么回事？
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linsui1989

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白诱导完后用上样缓冲液处理时样品发黏，是怎么回事？ 已有3人参与

我最近做大肠杆菌rosseta蛋白表达，用的是pet32a载体，但是处理时样品很粘稠，加样困难，是怎么回事？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-06-14 10:15:38
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younghe

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
linsui1989(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-15 21:13:36
菌体太多，多加一些buffer，或者buffer中的盐浓度不要太高，上样前离心
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2楼2014-06-15 15:15:22
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zep616745243

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
linsui1989(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-06-15 21:13:43
linsui1989: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-06-16 16:58:48
按分子克隆上的比例取样，多煮一会就行，另外离心速度要大一些，我的一般13000g，5min很彻底，取上清上样
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只有不断地失败才会成功
3楼2014-06-15 18:14:49
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sqd767019087

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-06-16 09:59:15
linsui1989: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-06-16 16:58:27
buffer不够 再加一倍
loading不够
煮时间不够
盐离子太高
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4楼2014-06-15 21:34:41
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