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wangxueflower

木虫 (小有名气)

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[交流] 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办已有6人参与

最近一直在做一个4kD小肽片段的western, 试过一般的SDS-Page,也尝试过tricine-SDS-page, 但是一直检测不到条带，
很是郁闷啊，这个小肽是一个前体蛋白经过酶切后的产物。我用的抗体也是一般常用的特异性抗体。上样量是30ug/孔。
是不是上样量太少的原因啊? 还有是不是因为这个小肽的产量不高？转膜方面，我用的是100V 冰上转膜一个半小时，是不是转过了？

请虫友们给点建议吧

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花开花落，云卷云舒

1楼 2014-06-12 12:39:37

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wangxueflower

木虫 (小有名气)

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引用回帖:

12楼: Originally posted by 凌波丽 at 2014-07-08 00:08:09
我刚又看了一下楼主的帖子，补充一些提示。

我上面是说的是针对SDS PAGE的，下面也提示一些小分子多肽转膜的注意几点：
1.小于10KD的分离胶用15%-20%，分离胶太稀，阻滞不了小肽，电泳完了，小肽也跑没有了；
...

谢谢啦，给了这么多好的建议，我想问下，小肽转膜时是不是有转过的现象啊，我也请教过其他人，有人说膜只是起到吸收的作用，一般不会透转的，您怎么看呢？